[發明專利]一種比率型熒光檢測H2S的試劑及其合成方法和應用

在審

• 申請號: 201710432662.X
• 申請日: 2017-06-09
• 公開（公告）號: CN107290312A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發明（設計）人: 康錦;霍方俊;陰彩霞
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司)14105
• 代理人: 張福增

1.一種比率型熒光檢測H₂S的試劑，其特征在于，是7-(二乙基氨基)-2-氧代-2H-色烯-4-基2-(吡啶-2-基二硫烷基)苯甲酸酯(HS-1)，結構式為：

2.如權利要求1所述的一種比率型熒光檢測H₂S試劑的合成方法，其特征在于，步驟為：

(1)在N₂保護下，0℃條件下向1摩爾當量丙二酸和2摩爾當量苯酚的混合物中緩慢滴加過量POCl₃，混合物加熱到115℃反應，直到大量HCl氣體被釋放，上層清液傾倒在水中，用乙酸乙酯萃取，合并有機層，在旋轉蒸發儀上蒸發后得棕色油狀化合物丙二酸二苯酯；

(2)將1摩爾當量丙二酸二苯酯和1摩爾當量間羥基-N,N-二乙基苯胺溶解在甲苯中，反應液回流7h；反應完成后冷卻至室溫，有固體析出，過濾，濾餅用正己烷洗滌，干燥，得黃色固體7-二乙胺基-4-羥基香豆素；

(3)將1摩爾當量二巰基吡啶溶于氯仿中，加入1摩爾當量2-巰基水楊酸，滴加1摩爾當量氯化亞砜，攪拌1h，生成淡黃色固體，抽濾，干燥得到化合物2-(吡啶-2-基二硫烷基)苯甲酸；

(4)將化合物1摩爾當量2-(吡啶-2-基二硫烷基)苯甲酸，1摩爾當量7-二乙胺基-4-羥基-香豆素，1摩爾當量1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，和0.1摩爾當量4-二甲基氨基吡啶，加入二氯甲烷中，室溫攪拌12h；旋轉蒸發除去溶劑并將剩余物過硅膠柱，得到黃色固體7-(二乙基氨基)-2-氧代-2H-色烯-4-基2-(吡啶-2-基二硫烷基)苯甲酸酯。

3.如權利要求1所述的試劑在H₂S檢測中的應用。

4.一種比率型熒光檢測H₂S的方法，其特征在于，步驟為：

(1)、配制pH＝7.4、濃度為10mM的PBS緩沖溶液，配制2mM的HS-1的DMSO溶液；

(2)、將2000μL pH 7.4的PBS緩沖溶液、5μL HS-1的DMSO溶液加到熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，隨著待測樣的加入，403nm的熒光強度逐漸增強，519nm的熒光逐漸減弱；

(3)、將2000μL pH 7.4的PBS緩沖溶液、5μL HS-1的DMSO溶液加到另外六個熒光比色皿中，分別再加入體積為0、40、80、120、160、200μL的HS^-溶液，在熒光分光光度儀上測定403/519對應的強度比值R為0.27，1.00，2.54，4.31，5.71，6.64，以H₂S濃度為橫坐標，以比值R為縱坐標繪制圖，得到H₂S濃度的工作曲線；線性回歸方程為：R＝0.036c-0.27，c的單位為μM；

(4)、將2000μL pH 7.4的PBS緩沖溶液、5μL HS-1的DMSO溶液加到干凈的熒光比色皿中，用微量進樣器吸取VμL待測樣品溶液，加入到此熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，將測得的比值代入步驟(3)的線性回歸方程，得到濃度c，待測樣品C_待測樣＝2000μL×c×10^-6/VμL，即可求得H₂S的濃度。