[發明專利]髓核細胞源性活性微載體的構建

有效

• 申請號: 201710432632.9
• 申請日: 2017-06-09
• 公開（公告）號: CN107308497B
• 公開（公告）日: 2019-11-26
• 發明（設計）人: 周校澎;陶軼卿;李方財;陳其昕
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/38;A61L27/50;A61L27/54
• 代理公司: 33200 杭州求是專利事務所有限公司
• 代理人: 趙杭麗<國際申請>=<國際公布>=<進入

1.一種髓核細胞源性活性微載體構建方法，其特征在于，具體構建方法如下：

（1）髓核細胞微球制備

取SD大鼠髓核細胞，使用F12培養基擴增至第3代，取4×10^⁵個髓核細胞使用1mL F12培養基重懸，并置于15mL離心管，通過離心富集法在1000rpm下離心5分鐘，在F12培養基中靜置24h，利用髓核細胞自卷曲能力獲得髓核細胞微球；

（2）髓核細胞微球基質合成

更換髓核細胞微球的培養環境：在DMEM高糖培養基中添加10ng/mL的TGF-β3，10%胎牛血清，50nM維生素C，于37℃，5%CO₂的環境中培養12天，每3天換一次液，促進髓核細胞微球中基質產生和沉積；

（3）獲得髓核細胞源性活性微載體

首先，聯合使用脫細胞劑2% Triton-100和50mM的SB-10對培養后的髓核細胞微球進行脫細胞處理，37℃恒溫搖床中以100轉/分鐘的速率處理1小時，在脫去髓核細胞后利用720mU/mL脫氧核糖核酸酶和720mU/mL核糖核酸酶對殘留核酸成分進行滅活，最后使用磷酸鹽緩沖液在先前搖床環境下對獲得的微載體清洗3次，每次5分鐘，從而獲得一種由髓核細胞自身分泌的基質構成的髓核細胞源性活性微載體。

2.根據權利要求1所述的一種髓核細胞源性活性微載體構建方法，其特征在于，步驟（1）所述的F12培養基為：3151 mg/L D-葡萄糖，365mg/L L-谷氨酰胺，55mg/L丙酮酸鈉，2438mg/L碳酸氫鈉，100U/mL青霉素，100ug/mL鏈霉素，pH 7.0-7.4。

3.根據權利要求2所述的一種髓核細胞源性活性微載體構建方法，其特征在于，步驟（2）所述的DMEM高糖培養基為：4500mg/L D-葡萄糖，584mg/L L-谷氨酰胺，110mg/L丙酮酸鈉，1.5g/L碳酸氫鈉，100U/mL青霉素，100ug/mL鏈霉素，pH 7.0-7.2。

4.根據權利要求1所述方法構建的活性微載體在負載干細胞中的應用。