[發明專利]一種β-甘露聚糖酶工程菌的篩選方法

有效

• 申請號: 201710432097.7
• 申請日: 2017-06-09
• 公開（公告）號: CN107129958B
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 李爽;樊吳迪
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12Q1/34;C12R1/19
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 宮愛鵬

1.一種β-甘露聚糖酶工程菌的篩選方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）將β-甘露聚糖酶的表達菌在含有臺酚藍的KT平板上培養，直至平板上產生水解圈；所述的培養包括三個階段：第一階段為37±2℃ 保溫6-12 h；第二階段為25±2℃ 保溫1-3h；第三階段為37^oC~50℃ 保溫8-20 h；

（2）測量水解圈直徑與微生物菌落直徑，以二者大小的比值作為β-甘露聚糖酶的酶活指數，該指數與酶活正相關；

所述β-甘露聚糖酶表達菌，其宿主菌為E. coli BL21(DE3)或E. coli BL21。

2.根據權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，所述第一階段為37 ℃ 保溫10 h。

3.根據權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，所述第二階段為25℃ 保溫2 h。

4.根據權利要求3所述的篩選方法，其特征在于，所述第三階段的保溫時間為12 h。

5.根據權利要求1~4任意一項所述的篩選方法，其特征在于，所述KT平板的原料組分為：1-2%蛋白胨、0.5-1%酵母提取物、1%氯化鈉、1-3%瓊脂和0.3-1%魔芋膠溶液。

6.根據權利要求5所述的篩選方法，其特征在于，所述KT平板的配制：將上述原料混合后115℃ 條件下高壓滅菌20 min，冷卻后加入預先配制好的1%臺酚藍溶液至終濃度為0.02-0.05%。

7.根據權利要求5所述的篩選方法，其特征在于，所述β-甘露聚糖酶表達菌，其表達載體為pET30(a)。