[發(fā)明專利]以葉片為外植體的玉露離體快繁方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710429395.0
• 申請日: 2017-06-08
• 公開（公告）號: CN107155890B
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發(fā)明（設計）人: 崔金騰;袁成飛;張克中
• 申請（專利權）人: 北京農(nóng)學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491
• 代理人: 姜彥

本發(fā)明的目的是為克服傳統(tǒng)玉露繁殖方法存在的繁殖速度慢，性狀不穩(wěn)定，成活率低等缺點；也為了克服前人玉露組織培養(yǎng)試驗中叢生芽誘導分化率低，再生周期長，不適合工廠化生產(chǎn)等缺點。發(fā)明提供一種玉露的離體快速繁殖方法，使玉露在相對短的時間內(nèi)產(chǎn)生大量遺傳背景穩(wěn)定，株型一致的再生植株。可以在不影響母株正常發(fā)育及繁殖的情況下使玉露在相對短的時間內(nèi)大規(guī)模繁殖，并且取材不受季節(jié)限制，再生周期短，愈傷組織誘導率高，叢生芽分化率高，植株移栽后生長狀態(tài)良好。非常適用于玉露稀缺品種的快速繁殖，平均單株再生苗的成本極低，非常適合工廠化生產(chǎn)。

技術領域

本發(fā)明屬于花卉繁殖方法，具體涉及花卉的無性快速繁殖方法。

背景技術

玉露，是百合科，十二卷屬，多年生草本植物，葉片肉質，肥厚飽滿。原產(chǎn)于南非，耐干旱，不耐寒，忌高溫潮濕和烈日暴曬。玉露幼株多為單生，后逐漸呈群生狀，肉質葉呈緊湊的蓮座狀排列。玉露外形玲瓏小巧，種類豐富，葉色晶瑩剔透，富于變化，深受國內(nèi)外花卉愛好者的喜愛，具有十分高的市場需求和經(jīng)濟價值。玉露的傳統(tǒng)繁殖方法，多采用播種繁殖，扦插繁殖和分株繁殖。其中，扦插繁殖和分株繁殖為無性繁殖，可以保持植株的性狀穩(wěn)定，但是繁殖周期長，產(chǎn)出效率較低，另外，播種繁殖為有性繁殖，容易使性狀產(chǎn)生分離，丟失母本的優(yōu)良性狀，并且幼苗成活率低，以上因素都極大的影響了生產(chǎn)效率和產(chǎn)品質量。植物組織培養(yǎng)即植物離體培養(yǎng)技術，根據(jù)植物細胞的全能性，利用植物體離體的器官(如根、莖、葉、莖尖、花、果實等)、組織(如形成層、表皮、皮層、胚乳等)或細胞(如大孢子、小孢子、體細胞等)以及原生體，在無菌和適宜的人工培養(yǎng)基及光照、溫度等人工條件下，能誘導出愈傷組織、不定芽、不定根，形成完整的植株或產(chǎn)生具有經(jīng)濟價值的其它產(chǎn)品的技術。由植物組織培養(yǎng)所產(chǎn)生的再生植株除了極低的變異外，基本都能保持親本(外植體來源植株)的優(yōu)良性狀。植株組織培養(yǎng)技術發(fā)明以來已經(jīng)取得了很大的進展。利用植物組織培養(yǎng)技術離體快速繁殖玉露可以大規(guī)模產(chǎn)生株型齊整的植株，進一步滿足市場需求。前人所做的玉露組培實驗雖然也有成功的先例，但是愈傷組織叢生芽誘導分化率低，導致產(chǎn)出效率低，極大阻礙了玉露的組織培養(yǎng)離體快繁在實際生產(chǎn)的大規(guī)模應用，并不具備市場化生產(chǎn)條件。本發(fā)明可使玉露在一年以內(nèi)實現(xiàn)快速繁殖，而且繁殖效率高，非常適合工廠化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為克服傳統(tǒng)玉露繁殖方法存在的繁殖速度慢，性狀不穩(wěn)定，成活率低等缺點；也為了克服前人玉露組織培養(yǎng)試驗中叢生芽誘導分化率低，再生周期長，不適合工廠化生產(chǎn)等缺點。提供一種玉露的離體快速繁殖方法，使玉露在相對短的時間內(nèi)產(chǎn)生大量遺傳背景穩(wěn)定，株型一致的再生植株。

本發(fā)明所采用的技術方案是：

1.外植體接種及愈傷組織誘導：取玉露植株的幼嫩葉片，放入無菌超凈臺中，用75％(體積/體積)酒精浸泡30～60s，用無菌水沖洗2～3次后，迅速倒入1.5～3％(質量/體積)次氯酸鈉溶液中浸泡8～10min，傾去次氯酸鈉溶液，再用無菌水沖洗4～5次，將處理好的玉露葉片，橫切成1cm左右小段；接種在含6-BA 0.5mg/L，NAA 0.1mg/L，KT 1mg/L，蔗糖3.0％(質量/體積)，瓊脂6.0％(質量/體積)，pH值為5.6～6.0的MS固體培養(yǎng)基上，光照強度為1500～2000Lux，光照時間每天12～14小時，培養(yǎng)溫度在24℃～28℃，40～50天繼代一次，待長出黃綠色粒狀愈傷時即可誘導分化。

2.叢生芽的誘導：將愈傷轉接到誘導分化培養(yǎng)基：MS+KT0.5mg/L+6-BA(0.1～0.2mg/L)+NAA(0～0.1mg/L)+IAA(0.1～0.5mg/L)+20.0％天然椰汁(體積/體積)，瓊脂6.0％(質量/體積)，pH值為5.6～6.0的MS培養(yǎng)基上。光照強度為1500～2000Lux，光照時間每天12～14小時，培養(yǎng)溫度在24℃～28℃，40～50天繼代一次，該愈傷分化能力可持續(xù)一年以上。從一塊愈傷經(jīng)過反復繼代可分化出800株左右的再生苗。