[發明專利]一種金花茶組培繁育方法

在審

• 申請號: 201710426483.5
• 申請日: 2017-06-08
• 公開（公告）號: CN107125136A
• 公開（公告）日: 2017-09-05
• 發明（設計）人: 胡賢根
• 申請（專利權）人: 合肥市風達農業有限責任公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 合肥道正企智知識產權代理有限公司34130
• 代理人: 閆艷艷

技術領域

本發明屬于植物組培繁育領域，具體涉及一種金花茶組培繁育方法。

背景技術

金花茶屬于山茶科、山茶屬，與茶、山茶、南山茶、油茶、茶梅等為孿生姐妹，是國家一級保護植物之一。金花茶的花金黃色，耀眼奪目，仿佛涂著一層蠟，晶瑩而油潤，似有半透明之感。金花茶單生于葉腋，花開時，有杯狀的、壺狀的或碗狀的，嬌艷多姿，秀麗雅致。以前，人們沒有見到過花色金黃的種類。1960年，中國科學工作者首次在廣西防城一帶發現了一種金黃色的山茶花，被命名為金花茶。國外稱之為神奇的東方魔茶，被譽為“植物界大熊貓”、“茶族皇后”。

然而，傳統的茶花繁殖方法(扦插、嫁接、壓條、播種)對金花茶的植株和種子材料需求量大，嚴重制約珍稀瀕危金花茶物種的保護和大量繁殖；同時，這一繁育瓶頸也使得一些名貴的結實率低的茶花雜交新品種難以擴大推廣。因此，實現金花茶的快速繁殖是當前金花茶育種工作者的當務之急。

植物組織培養是在無菌條件下，將植物的離體器官、組織、細胞或原生質體，培養在人工配制的培養基上，人為控制培養基條件，使其生長、分化、增殖，發育成完整植株的過程。由于組織培養是在脫離植物母體的條件下進行的，所以也稱為離體培養。植物組織培養具有所需植株原材料少，不受生長季節限制，培養周期短，變異低，可保持母本的優良遺傳特性等優點；因此，植物組織培養技術可用于拯救瀕危植物，解決植物產種子少或無而無法大量繁殖的難題。植物組織培養技術無疑是茶花育種工作者的福音，這為金花茶的繁育提供了更加可行的方案，避免了雜交一代的純種選育工作，大大縮短了育種期限。已有茶花育種工作者進行了相關方面的研究，李建安等(2003)對小果油茶和廣寧紅花油茶的花藥進行離體培養，并誘導形成愈傷組織；陳麗華(2007)等以云南紅花油茶的嫩芽及帶芽嫩莖段為外植體材料，研究探索其莖尖組織培養的外植體處理方法和叢芽誘導培養基，篩選出了云南紅花油茶較適宜的叢芽誘導培養基；高宇瓊和賴鐘雄(2010)以金花茶子葉胚切塊和成年植株葉片為材料，進行愈傷組織培養研究，成功誘導出愈傷組織，并能較好地繼代。

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明提供了一種金花茶組培繁育方法，該種組培繁育方法不受季節影響，培育時間短，繁殖速率快，解決了目前金花茶種質資源稀少，結果率低等問題，實現了金花茶良種低成本大規模繁育。

為了達到上述目的，本發明通過以下技術方案來實現的：

一種金花茶組培繁育方法，按照以下步驟進行：

(1)外植體的選擇及消毒：選取健康無病的金花茶種子作為外植體，先將種子經流水沖洗2-4min后，在超凈工作臺上用體積百分數為75％的乙醇溶液表面滅菌1-3min，無菌水沖洗3次，質量百分數為0.1％的HgCl₂溶液滅菌4-6min，無菌水沖洗4次；

(2)金花茶提取液的制備：取適量新鮮嫩綠的金花茶葉片加入到開放的提取罐中，加入水加熱到煮沸狀態煎煮40-60min，葉片與水的料液體積比為1:2-4，之后倒出提取液至液體存儲罐中；再向提取罐中加入水加熱到煮沸狀態煎煮1-2h，且葉片與水的料液體積比為1:3-5，倒出提取液至所述液體存儲罐中，最后濃縮液體存儲罐中的提取液至原體積的1/5-1/3，得金花茶提取液；

(3)初代誘導培養：把步驟(1)經消毒的種子，接種到初代誘導培養基上，在無菌條件下，培養8-12天，直至所述種子長出頂芽；

初代誘導培養基為1/2MS基本培養基+金花茶提取液0.8～1.2g/L+6-BA 0.4～0.8mg/L+NAA 0.2～0.6mg/L+蔗糖20～30g/L+營養液4.0～8.0g/L；

(4)繼代增殖培養：將所述頂芽接種到繼代增殖培養基上培養16-20天，誘導頂芽增殖，得叢生芽；

增殖培養基為1/2B5基本培養基+金花茶提取液0.8～1.2g/L+6-BA 0.4～0.6mg/L+NAA 0.3～0.5mg/L+蔗糖20～30g/L+瓊脂4.0～6.0g/L；

(5)生根培養：待所述叢生芽的單芽長至3.0～5.0cm時，將金花茶組培苗接種到生根培養基中進行誘導生根培養22～26天；

生根培養基為DCR培養基+金花茶提取液1.0～1.6g/L+IBA 0.6～0.8mg/L+NAA0.4～0.6mg/L+蔗糖15～25g/L+瓊脂6.0～8.0g/L；