[發明專利]一種用于測定生物基質中硒代蛋氨酸的方法

在審

• 申請號: 201710425872.6
• 申請日: 2017-06-08
• 公開（公告）號: CN109030638A
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 張雙慶;俞學鋒;李知洪;姚鵑;張彥;張海波;彭寧;陳智仙
• 申請（專利權）人: 安琪酵母股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/14
• 代理公司: 北京格旭知識產權代理事務所(普通合伙) 11443
• 代理人: 雒純丹

1.一種用于測定生物基質中硒代蛋氨酸的方法，其特征在于，其包括下述步驟：

(1)樣品預處理：取生物基質樣品，加入內標物甲基硒代半胱氨酸，然后用蛋白質沉淀法處理所述生物基質樣品，離心得到上清液；

(2)含量測定：采用高效液相色譜串聯質譜色譜法，將步驟(1)中上清液注入色譜儀，采用內標標準曲線法計算生物基質樣品中硒代蛋氨酸的濃度。

2.根據權利要求1所述的用于測定生物基質中硒代蛋氨酸的方法，其特征在于，所述生物基質樣品包含全血、血漿、血清、乳汁、心、肝、脾、肺、腎、胃、腸道、生殖腺、腦、體脂、肌肉、膽汁、尿液或糞便中的一種。

3.根據權利要求1或2所述的用于測定生物基質中硒代蛋氨酸的方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述用蛋白質沉淀法處理所述生物基質樣品的的方法包括下述步驟：在生物基質中加入內標物甲基硒代半胱氨酸，然后加入高氯酸進行處理。

4.根據權利要求3所述的用于測定生物基質中硒代蛋氨酸的方法，其特征在于，所述高氯酸的質量濃度為5-10％，所述高氯酸與生物基質樣品的體積比為1:1。

5.根據權利要求1-4任一項所述的用于測定生物基質中硒代蛋氨酸的方法，其特征在于，所述高效液相色譜串聯質譜的色譜條件為：色譜柱為Acquity XEVO HSS T3，流動相A為0.1-0.5％甲酸水溶液，流動相B為0.1-0.5％甲酸乙腈溶液進行梯度洗脫；

所述高效液相色譜串聯質譜的質譜條件為：采用電噴霧離子化電離源，正離子方式檢測，多反應監測進行二級質譜分析。

6.根據權利要求1-5任一項所述的用于測定生物基質中硒代蛋氨酸的方法，其特征在于，所述內標物的制備方法包括下述步驟：取內標物甲基硒代半胱氨酸，加水溶解，得到濃度為1-5mg/ml的內標物標準儲備液，然后將內標物標準儲備液用水稀釋，得到內標物的濃度為1-5μg/ml。

7.根據權利要求1-6任一項所述的用于測定生物基質中硒代蛋氨酸的方法，其特征在于，還包括標準樣品制備的步驟，所述步驟包括下述處理操作：取硒代蛋氨酸，加水溶解，得到濃度為1mg/ml的標準儲備液，然后加水進行稀釋，得到濃度為20-2000ng/ml的一系列濃度遞增的標準工作液；取空白生物基質樣品，加入上述一系列濃度遞增的標準工作液，得到一系列標準樣品。

8.根據權利要求7所述的用于測定生物基質中硒代蛋氨酸的方法，其特征在于，所述一系列標準樣品的濃度范圍為2-200ng/ml。

9.根據權利要求1-8任一項所述的用于測定生物基質中硒代蛋氨酸的方法，其特征在于，所述生物基質是大鼠生物基質。

10.根據權利要求1-8任一項所述的用于測定生物基質中硒代蛋氨酸的方法，其特征在于，所述生物基質是采自大鼠的血漿。