[發(fā)明專利]一種利于蘋果愈傷的蘋果MdARF5基因及其應(yīng)用在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201710425692.8 | 申請(qǐng)日： | 2017-06-08 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN107164386A | 公開（公告）日： | 2017-09-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 王小非;郝玉金;安建平 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 山東農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N15/29 | 分類號(hào)： | C12N15/29;C12N15/10;C07K14/415;C12N15/82;A01H5/00 |
| 代理公司： | 北京輕創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11212 | 代理人： | 楊立,王博 |
| 地址： | 271018 山*** | 國(guó)省代碼： | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 利于 蘋果 mdarf5 基因 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種利于蘋果愈傷的蘋果MdARF5基因，其特征在于，所述MdARF5基因的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利于蘋果愈傷的蘋果MdARF5基因，其特征在于，所述MdARF5基因的核苷酸序列編碼的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2所示。
3.一種利于蘋果愈傷的蘋果MdARF5基因的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)提取蘋果組培葉片中的RNA及反轉(zhuǎn)錄；
(2)cDNA全長(zhǎng)序列的獲得：根據(jù)NCBI查到的蘋果愈傷中MIEL1基因保守氨基酸序列，設(shè)計(jì)兼并引物MdARF5-F、MdARF5-R，然后以反轉(zhuǎn)錄合成的蘋果基因組cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到cDNA全長(zhǎng)序列；其中，MdARF5-F序列如SEQ.ID.NO.3所示，MdARF5-R序列如SEQ.ID.NO.4所示；
(3)PCR產(chǎn)物進(jìn)行回收、載體連接、轉(zhuǎn)化、測(cè)序，即得到所述蘋果MdARF5基因。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種利于蘋果愈傷的蘋果MdARF5基因的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系為：
PCR反應(yīng)程序?yàn)?4℃預(yù)變性5min；循環(huán)參數(shù)為94℃變性30s、56℃退火30s、72℃延伸90s，進(jìn)行32個(gè)循環(huán)；72℃充分延伸10min。
5.權(quán)利要求1或2所述的利于蘋果愈傷的蘋果MdARF5基因在轉(zhuǎn)基因蘋果愈傷中的應(yīng)用。
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