[發明專利]一種利用pH示差法測定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法

在審

• 申請號: 201710425672.0
• 申請日: 2017-06-08
• 公開（公告）號: CN107247030A
• 公開（公告）日: 2017-10-13
• 發明（設計）人: 劉海英;高遠;邢晨濤;陸順麗;李靜圓;李燕萍;易茜
• 申請（專利權）人: 河南師范大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 新鄉市平原智匯知識產權代理事務所(普通合伙)41139
• 代理人: 路寬

技術領域

本發明屬于菊花栽培和工業提取花青素苷技術領域，具體涉及一種利用pH示差法測定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法。

背景技術

菊花，多年生草本植物，其頭狀花序色澤艷麗，富含黃酮類化合物、三萜類化合物和揮發油等多種有效成分，具有重要的觀賞、食用、茶用和藥用價值。花青素苷，屬黃酮類化合物，是植物主要的呈色物質，能夠清除自由基，具有抗氧化作用，在食品、保健、醫藥和化妝品領域的應用日趨受到人們的關注。在所有色系的菊花品種中，紫色系菊花花瓣中花青素苷含量最高，從紫色菊花花瓣中工業化提取花青素苷對于延伸菊花產業鏈，提高菊花產業的總效益具有重要的意義。

有關紫色菊花花瓣中花青素苷的研究，目前主要集中在花青素苷的提取方面，有關其花青素苷的含量檢測方法的研究目前報道較少。已有紫色菊花花青素苷的檢測，常用單一pH下的分光光度法和高效液相色譜法兩種方法進行，由于菊花花青素提取過程中所得到的浸提液成分復雜，難免會有干擾物影響單一pH下的分光光度法對花青素苷含量的檢測；用高效液相色譜法檢測花青素苷的含量，則存在所需儀器設備較為昂貴的局限性。pH示差法能夠有效減少干擾物對花青素苷含量檢測的影響，且設備費用投入較小。目前，使用pH示差法檢測花青素苷含量的研究逐漸增多，但在紫色菊花花青素苷檢測方面目前報道較少，有關檢測方法中的相關參數目前仍不清楚。

發明內容

本發明解決的技術問題是提供了一種利用pH示差法測定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法，該方法利用pH示差法確定檢測紫色菊花花青素苷含量的相關參數，對檢測波長、pH和平衡時間進行篩選，通過測定花青素苷含量及計算單花序花青素苷含量的變化確定出紫色菊花的最佳采收時期，為工業提取花青素苷提供技術支持。

本發明為解決上述技術問題采用如下技術方案，一種利用pH示差法測定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法，其特征在于具體步驟為：

（1）紫色菊花樣品的采集；

（2）花青素苷浸提液的制備；

（3）紫色菊花樣品中花青素苷的浸提；

（4）pH示差法條件參數檢測波長、pH及平衡時間的確定；

（5）紫色菊花花青素苷含量的測定；

（6）確定紫色菊花最佳采收期。

進一步優選，步驟（1）的具體過程為：從紫色菊花開花進程選取4個取樣時期分別取菊花頭狀花序，將菊花頭狀花序鼓風干燥72h后準確稱取0.2g菊花花瓣樣品作為待測樣品。

進一步優選，步驟（2）的具體過程為：將體積分數為80%的乙醇溶液與摩爾濃度為0.1mol/L的鹽酸溶液以1:2的體積比混合均勻配制成花青素苷浸提液。

進一步優選，步驟（3）的具體過程為：將準確稱取的0.2g待測樣品剪至1cm置于10mL的離心管中，再添加10mL花青素苷浸提液，在室溫下浸提24h后濾去花瓣，花青素苷濾液用于花青素苷含量的測定，浸提過程中用雙層黑色塑料袋遮光以防止花青素苷的降解，并且每隔2-3h充分攪拌1次。

進一步優選，步驟（4）的具體過程為：

檢測波長的確定，利用紫外-可見分光光度計對矢車菊色素-3-O-葡萄糖苷標準品和花青素苷濾液在200-800nm范圍內進行全波段掃描，在可見光區內，矢車菊色素-3-O-葡萄糖苷的最大吸收峰在511nm附近，花青素苷濾液中花青素苷的最大吸收峰在515nm附近，二者吸收峰相近，因此，確定515nm為花青素苷濾液中花青素苷的最大吸收波長，參考矢車菊色素-3-O-葡萄糖苷中的相關參數來計算花青素苷濾液中花青素苷的含量；

pH的確定，先將花青素苷濾液稀釋4倍，再分別準確量取稀釋后的花青素苷濾液1mL于9個試管中，然后分別加入pH為0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、4.5、5.0、6.0的緩沖液9mL，以浸提液調零，測定最大吸收波長下的吸光度，花青素苷濾液中花青素苷在pH1.0和pH4.5處的吸光度值的差值最大，并且在此兩處的pH附近吸光度值變化較小，所以選擇在pH1.0和pH4.5條件下測定花青素苷濾液中的花青素苷含量；