[發(fā)明專利]一種利用pH示差法測(cè)定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710425672.0
• 申請(qǐng)日: 2017-06-08
• 公開（公告）號(hào): CN107247030A
• 公開（公告）日: 2017-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉海英;高遠(yuǎn);邢晨濤;陸順麗;李靜圓;李燕萍;易茜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南師范大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31
• 代理公司: 新鄉(xiāng)市平原智匯知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)41139
• 代理人: 路寬

1.一種利用pH示差法測(cè)定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法，其特征在于具體步驟為：

（1）紫色菊花樣品的采集；

（2）花青素苷浸提液的制備；

（3）紫色菊花樣品中花青素苷的浸提；

（4）pH示差法條件參數(shù)檢測(cè)波長(zhǎng)、pH及平衡時(shí)間的確定；

（5）紫色菊花花青素苷含量的測(cè)定；

（6）確定紫色菊花最佳采收期。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用pH示差法測(cè)定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法，其特征在于步驟（1）的具體過(guò)程為：從紫色菊花開花進(jìn)程選取4個(gè)取樣時(shí)期分別取菊花頭狀花序，將菊花頭狀花序鼓風(fēng)干燥72h后準(zhǔn)確稱取0.2g菊花花瓣樣品作為待測(cè)樣品。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用pH示差法測(cè)定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法，其特征在于步驟（2）的具體過(guò)程為：將體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇溶液與摩爾濃度為0.1mol/L的鹽酸溶液以1:2的體積比混合均勻配制成花青素苷浸提液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用pH示差法測(cè)定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法，其特征在于步驟（3）的具體過(guò)程為：將準(zhǔn)確稱取的0.2g待測(cè)樣品剪至1cm置于10mL的離心管中，再添加10mL花青素苷浸提液，在室溫下浸提24h后濾去花瓣，花青素苷濾液用于花青素苷含量的測(cè)定，浸提過(guò)程中用雙層黑色塑料袋遮光以防止花青素苷的降解，并且每隔2-3h充分?jǐn)嚢?次。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用pH示差法測(cè)定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法，其特征在于步驟（4）的具體過(guò)程為：

檢測(cè)波長(zhǎng)的確定，利用紫外-可見分光光度計(jì)對(duì)矢車菊色素-3-O-葡萄糖苷標(biāo)準(zhǔn)品和花青素苷濾液在200-800nm范圍內(nèi)進(jìn)行全波段掃描，在可見光區(qū)內(nèi)，矢車菊色素-3-O-葡萄糖苷的最大吸收峰在511nm附近，花青素苷濾液中花青素苷的最大吸收峰在515nm附近，二者吸收峰相近，因此，確定515nm為花青素苷濾液中花青素苷的最大吸收波長(zhǎng)，參考矢車菊色素-3-O-葡萄糖苷中的相關(guān)參數(shù)來(lái)計(jì)算花青素苷濾液中花青素苷的含量；

pH的確定，先將花青素苷濾液稀釋4倍，再分別準(zhǔn)確量取稀釋后的花青素苷濾液1mL于9個(gè)試管中，然后分別加入pH為0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、4.5、5.0、6.0的緩沖液9mL，以浸提液調(diào)零，測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)下的吸光度，花青素苷濾液中花青素苷在pH1.0和pH4.5處的吸光度值的差值最大，并且在此兩處的pH附近吸光度值變化較小，所以選擇在pH1.0和pH4.5條件下測(cè)定花青素苷濾液中的花青素苷含量；

平衡時(shí)間的確定，先將花青素苷濾液用浸提液稀釋4倍，然后取0.5mL稀釋后的花青素苷濾液加入4.5mL pH1.0的緩沖溶液，記錄樣品溶液與緩沖溶液混合后的時(shí)間，以浸提液調(diào)零，室溫下設(shè)置平衡時(shí)間在0-150 min，每隔15min測(cè)一次最大吸收波長(zhǎng)下的吸光度，用同樣的方法測(cè)pH4.5的緩沖溶液下樣品的平衡時(shí)間，在pH1.0的緩沖溶液中，花青素苷的吸光度值隨時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增加，在60min后趨于穩(wěn)定，在pH4.5的緩沖溶液中，花青素苷的吸光度值隨時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸減少，在105min后趨于穩(wěn)定，根據(jù)兩者的數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合考慮，平衡時(shí)間選擇為105min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用pH示差法測(cè)定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法，其特征在于步驟（5）的具體過(guò)程為：將花青素苷濾液用浸提液稀釋4倍，然后取1mL稀釋后的花青素苷濾液加入pH1.0的緩沖溶液定容至10mL，室溫下平衡105min，以浸提液調(diào)零，分別在最大吸收波長(zhǎng)和700nm處測(cè)定吸光度值，然后用同樣的方法測(cè)定花青素苷濾液在pH4.5的緩沖溶液中最大吸收波長(zhǎng)和700 nm處的吸光度值，然后代入公式（1）計(jì)算紫色菊花花青素苷含量，

X=?T*V*F*M*1000/ε*m（1）

其中X為紫色菊花花青素苷含量，mg/g；V為稀釋體積，L；F為稀釋倍數(shù)；M=449.2；ε=26900；?T為吸光度值，?T=(A_λmax-A_700nm)_ph1.0-(A_λmax-A_700nm)_ph4.5；m為樣品質(zhì)量，g。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用pH示差法測(cè)定紫色菊花花青素苷含量從而確定最佳采收期的方法，其特征在于步驟（6）的具體過(guò)程為：綜合所測(cè)得的紫色菊花花青素苷含量和計(jì)算得到的單花序花青素苷含量，篩選出紫色菊花花青素苷含量較高且不同取樣批次間均勻度高，同時(shí)單花序花青素苷含量也較高的采樣時(shí)期，從而確定紫色菊花的最佳采收時(shí)期。