[發(fā)明專利]一種核酸雜交化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710424227.2
• 申請(qǐng)日: 2017-06-07
• 公開（公告）號(hào): CN107058584A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃寶福;章喜超;章曉媛;葉德;王哲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江殷欣生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 嘉興永航專利代理事務(wù)所(普通合伙)33265
• 代理人: 侯蘭玉

1.一種核酸雜交化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法，其特征在于該方法包括如下步驟：

（1）根據(jù)目標(biāo)核酸的序列設(shè)計(jì)捕獲核酸序列和信號(hào)核酸序列，其中捕獲核酸序列5’端進(jìn)行氨基修飾，信號(hào)核酸序列5’標(biāo)記生物素；

（2）將捕獲核酸序列固定到基質(zhì)上；

（3）通過核酸雜交反應(yīng)，捕獲核酸序列和待測(cè)目標(biāo)核酸結(jié)合；

（4）通過核酸雜交反應(yīng)，標(biāo)記了生物素的信號(hào)核酸序列和結(jié)合在捕獲核酸序列上的待測(cè)目標(biāo)核酸結(jié)合；

（5）通過生物素-親和素的特異性結(jié)合反應(yīng)，把標(biāo)記了鏈霉親和素的微球結(jié)合到信號(hào)核酸序列上；

（6）通過生物素-親和素的特異性結(jié)合反應(yīng)，生物素-堿性磷酸酶和微球上的鏈霉親和素結(jié)合；

（7）通過上述反應(yīng)固定到基質(zhì)上的生物素-堿性磷酸酶和發(fā)光底物反應(yīng)，通過化學(xué)發(fā)光分析儀讀取結(jié)果，根據(jù)檢測(cè)值和空白對(duì)照值的差異來判斷待測(cè)的樣本中是否含有目標(biāo)核酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸雜交化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法，其特征在于：所述的微球是聚苯乙烯(PS)、交聯(lián)聚苯乙烯/聚二乙烯基苯 (P[S/DVB])或聚甲基丙烯酸酯(PMMA) 微球，微球的直徑為50-500nm。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸雜交化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法，其特征在于：所述捕獲核酸序列和目標(biāo)核酸的特定片段互補(bǔ)，且長度在15-50個(gè)堿基。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸雜交化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法，其特征在于：所述信號(hào)核酸序列和目標(biāo)核酸的特定片段互補(bǔ)，且長度在15-50個(gè)堿基。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸雜交化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法，其特征在于：所述基質(zhì)是微孔板、微球、玻片、硅片或微流體芯片。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的核酸雜交化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法，其特征在于：當(dāng)基質(zhì)是氨基修飾的微孔板則通過戊二醛固定，當(dāng)基質(zhì)是羧基修飾的微球時(shí)，通過1-乙基-3-（3-二甲基氨丙基）-碳化二亞胺固定。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或3或4所述的核酸雜交化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法，其特征在于：捕獲核酸序列和信號(hào)核酸序列分別針對(duì)目標(biāo)核酸的不同片段。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸雜交化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法，其特征在于：所述發(fā)光底物是C₁₈H₂₁Na₂O₇P(AMPPD)、C₁₈H₂₀ClNa₂O₇P(CSPD)、C₁₈H₂₀ClNa₂O₇P(ADP-Star)或C₁₈H₁₉Cl₂O₇Na₂P(CDP-Star)。