[發(fā)明專利]一種核酸雜交化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201710424227.2 | 申請(qǐng)日: | 2017-06-07 |
| 公開(公告)號(hào): | CN107058584A | 公開(公告)日: | 2017-08-18 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 黃寶福;章喜超;章曉媛;葉德;王哲 | 申請(qǐng)(專利權(quán))人: | 浙江殷欣生物技術(shù)有限公司 |
| 主分類號(hào): | C12Q1/68 | 分類號(hào): | C12Q1/68 |
| 代理公司: | 嘉興永航專利代理事務(wù)所(普通合伙)33265 | 代理人: | 侯蘭玉 |
| 地址: | 311100 浙江省杭州市*** | 國省代碼: | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 核酸 雜交 化學(xué) 發(fā)光 檢測(cè) 方法 | ||
1.一種核酸雜交化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法,其特征在于該方法包括如下步驟:
(1)根據(jù)目標(biāo)核酸的序列設(shè)計(jì)捕獲核酸序列和信號(hào)核酸序列,其中捕獲核酸序列5’端進(jìn)行氨基修飾,信號(hào)核酸序列5’標(biāo)記生物素;
(2)將捕獲核酸序列固定到基質(zhì)上;
(3)通過核酸雜交反應(yīng),捕獲核酸序列和待測(cè)目標(biāo)核酸結(jié)合;
(4)通過核酸雜交反應(yīng),標(biāo)記了生物素的信號(hào)核酸序列和結(jié)合在捕獲核酸序列上的待測(cè)目標(biāo)核酸結(jié)合;
(5)通過生物素-親和素的特異性結(jié)合反應(yīng),把標(biāo)記了鏈霉親和素的微球結(jié)合到信號(hào)核酸序列上;
(6)通過生物素-親和素的特異性結(jié)合反應(yīng),生物素-堿性磷酸酶和微球上的鏈霉親和素結(jié)合;
(7)通過上述反應(yīng)固定到基質(zhì)上的生物素-堿性磷酸酶和發(fā)光底物反應(yīng),通過化學(xué)發(fā)光分析儀讀取結(jié)果,根據(jù)檢測(cè)值和空白對(duì)照值的差異來判斷待測(cè)的樣本中是否含有目標(biāo)核酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸雜交化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法,其特征在于:所述的微球是聚苯乙烯(PS)、交聯(lián)聚苯乙烯/聚二乙烯基苯 (P[S/DVB])或聚甲基丙烯酸酯(PMMA) 微球,微球的直徑為50-500nm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸雜交化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法,其特征在于:所述捕獲核酸序列和目標(biāo)核酸的特定片段互補(bǔ),且長度在15-50個(gè)堿基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸雜交化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法,其特征在于:所述信號(hào)核酸序列和目標(biāo)核酸的特定片段互補(bǔ),且長度在15-50個(gè)堿基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸雜交化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法,其特征在于:所述基質(zhì)是微孔板、微球、玻片、硅片或微流體芯片。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的核酸雜交化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法,其特征在于:當(dāng)基質(zhì)是氨基修飾的微孔板則通過戊二醛固定,當(dāng)基質(zhì)是羧基修飾的微球時(shí),通過1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺固定。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或3或4所述的核酸雜交化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法,其特征在于:捕獲核酸序列和信號(hào)核酸序列分別針對(duì)目標(biāo)核酸的不同片段。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸雜交化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法,其特征在于:所述發(fā)光底物是C18H21Na2O7P(AMPPD)、C18H20ClNa2O7P(CSPD)、C18H20ClNa2O7P(ADP-Star)或C18H19Cl2O7Na2P(CDP-Star)。
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