[發明專利]一種核酸雜交化學發光檢測方法在審
| 申請號： | 201710424227.2 | 申請日： | 2017-06-07 |
| 公開（公告）號： | CN107058584A | 公開（公告）日： | 2017-08-18 |
| 發明（設計）人： | 黃寶福;章喜超;章曉媛;葉德;王哲 | 申請（專利權）人： | 浙江殷欣生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 嘉興永航專利代理事務所(普通合伙)33265 | 代理人： | 侯蘭玉 |
| 地址： | 311100 浙江省杭州市*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 核酸 雜交 化學 發光 檢測 方法 | ||
1.一種核酸雜交化學發光檢測方法，其特征在于該方法包括如下步驟：
（1）根據目標核酸的序列設計捕獲核酸序列和信號核酸序列，其中捕獲核酸序列5’端進行氨基修飾，信號核酸序列5’標記生物素；
（2）將捕獲核酸序列固定到基質上；
（3）通過核酸雜交反應，捕獲核酸序列和待測目標核酸結合；
（4）通過核酸雜交反應，標記了生物素的信號核酸序列和結合在捕獲核酸序列上的待測目標核酸結合；
（5）通過生物素-親和素的特異性結合反應，把標記了鏈霉親和素的微球結合到信號核酸序列上；
（6）通過生物素-親和素的特異性結合反應，生物素-堿性磷酸酶和微球上的鏈霉親和素結合；
（7）通過上述反應固定到基質上的生物素-堿性磷酸酶和發光底物反應，通過化學發光分析儀讀取結果，根據檢測值和空白對照值的差異來判斷待測的樣本中是否含有目標核酸。
2.根據權利要求1所述的核酸雜交化學發光檢測方法，其特征在于：所述的微球是聚苯乙烯(PS)、交聯聚苯乙烯/聚二乙烯基苯 (P[S/DVB])或聚甲基丙烯酸酯(PMMA) 微球，微球的直徑為50-500nm。
3.根據權利要求1所述的核酸雜交化學發光檢測方法，其特征在于：所述捕獲核酸序列和目標核酸的特定片段互補，且長度在15-50個堿基。
4.根據權利要求1所述的核酸雜交化學發光檢測方法，其特征在于：所述信號核酸序列和目標核酸的特定片段互補，且長度在15-50個堿基。
5.根據權利要求1所述的核酸雜交化學發光檢測方法，其特征在于：所述基質是微孔板、微球、玻片、硅片或微流體芯片。
6.根據權利要求1或5所述的核酸雜交化學發光檢測方法，其特征在于：當基質是氨基修飾的微孔板則通過戊二醛固定，當基質是羧基修飾的微球時，通過1-乙基-3-（3-二甲基氨丙基）-碳化二亞胺固定。
7.根據權利要求1或3或4所述的核酸雜交化學發光檢測方法，其特征在于：捕獲核酸序列和信號核酸序列分別針對目標核酸的不同片段。
8.根據權利要求1所述的核酸雜交化學發光檢測方法，其特征在于：所述發光底物是C18H21Na2O7P(AMPPD)、C18H20ClNa2O7P(CSPD)、C18H20ClNa2O7P(ADP-Star)或C18H19Cl2O7Na2P(CDP-Star)。
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