[發明專利]一種檢測食管鱗癌相關基因TFPI2和HSPB2啟動子甲基化程度的試劑盒

在審

• 申請號: 201710422533.2
• 申請日: 2017-06-07
• 公開（公告）號: CN107177679A
• 公開（公告）日: 2017-09-19
• 發明（設計）人: 顧春雨;程志斌;郭輝
• 申請（專利權）人: 北京呈諾醫學科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京衛平智業專利代理事務所(普通合伙)11392
• 代理人: 董琪

1.一種檢測食管鱗癌相關基因TFPI2和HSPB2啟動子甲基化程度的試劑盒，其特征在于：包括TFPI2和HSPB2基因啟動子CpG位點的甲基化特異性擴增正向引物、反向引物及其非甲基化特異性擴增正向引物和反向引物、內參基因ACTB擴增正向引物和反向引物；

所述TFPI2基因啟動子CpG位點為TFPI2基因起始密碼子ATG上游300bp序列內所包含的至少一個CpG位點；所述HSPB2基因啟動子CpG位點為HSPB2基因起始密碼子ATG上游300bp序列內所包含的至少一個CpG位點；所述內參基因ACTB擴增引物不包含ACTB基因序列內任何CpG位點；

所述的TFPI2基因啟動子CpG位點的甲基化特異性擴增正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：

5’-CGGTCGGACGTTCGTTTCGTATAAAGC-3’；

所述的TFPI2基因啟動子CpG位點的甲基化特異性擴增反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示：

5’-GAACGACCCGCTAAACAAAACGT-3’；

所述的TFPI2基因啟動子CpG位點的非甲基化特異性擴增正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示：

5’-TTGGTTGGATGTTTGTTTTGTATAAAGTG-3’；

所述的TFPI2基因啟動子CpG位點的非甲基化特異性擴增反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示：

5’-AAACAACCCACTAAACAAAACATC-3’；

所述的HSPB2基因啟動子CpG位點的甲基化特異性擴增正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示：

5’-CGTGTAAATCGTTTGTGAGGGTTTTAGC-3’；

所述的HSPB2基因啟動子CpG位點的甲基化特異性擴增反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示：

5’-CGAAAATATAACCAACGCCGCCC-3’；

所述的HSPB2基因啟動子CpG位點的非甲基化特異性擴增正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示：

5’-TGTGTAAATTGTTTGTGAGGGTTTTAGTG-3’；

所述的HSPB2基因啟動子CpG位點的非甲基化特異性擴增反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示：

5’-CAAAAATATAACCAACACCACCCAAACCC-3’；

所述的ATCB基因擴增正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示：

5’-GTGTTTAAGATAGTGTTGTGGGTG-3’；

所述的ATCB基因擴增反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示：

5’-CCTACTATACACCTACTTAATACACACTCC-3’。

2.如權利要求1所述的檢測食管鱗癌相關基因TFPI2和HSPB2啟動子甲基化程度的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中還包括陰性質控品、陽性質控品和無模板對照。

3.如權利要求2所述的檢測食管鱗癌相關基因TFPI2和HSPB2啟動子甲基化程度的試劑盒，其特征在于：所述陽性質控品為亞硫酸氫鹽修飾的全甲基化人類基因組DNA，所述陰性質控品為亞硫酸氫鹽修飾的非甲基化人類基因組DNA，所述無模板對照是指不含人類基因組DNA的反應體系。

4.如權利要求3所述的檢測食管鱗癌相關基因TFPI2和HSPB2啟動子甲基化程度的試劑盒，其特征在于：所述無模板對照是用無菌水代替模板DNA的反應體系。

5.如權利要求1所述的檢測食管鱗癌相關基因TFPI2和HSPB2啟動子甲基化程度的試劑盒，其特征在于：所述引物的純度達到PAGE級或HPLC級。

6.如權利要求1所述的檢測食管鱗癌相關基因TFPI2和HSPB2啟動子甲基化程度的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中，熒光PCR擴增反應體系的終濃度組成為：1～10×PCR緩沖液、0.1～1mMdNTPs、0.05～20ng/μl模板DNA、0.01～0.10Μ/μl Taq DNA聚合酶、1～5mM氯化鎂、1～2×SYBR Green核酸染料、0.1～1μM引物。