[發(fā)明專利]進行ADD1基因rs4961位點多態(tài)性的分型檢測方法

在審

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• 申請日: 2017-06-07
• 公開（公告）號: CN107058583A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉虎;楊隨娟;楊燕燕
• 申請（專利權(quán)）人: 上海龍鼎醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體是進行ADD1基因rs4961位點多態(tài)性的分型檢測方法。

背景技術(shù)

高血壓以收縮或舒張壓持續(xù)增高為主要表現(xiàn)，是最常見的心血管疾病，同時也是其他心腦血管疾病的主要危險因素。高血壓可分為原發(fā)性高血壓和繼發(fā)性高血壓，其中病因不明的高血壓被稱之為原發(fā)性高血壓，占總高血壓的95%以上。長期的高血壓會使心臟和血管結(jié)構(gòu)及功能發(fā)生改變，是引起心肌梗死、心力衰竭、慢性腎臟病及腦卒等疾病的重要因素，給家庭和社會造成沉重的負擔。

高血壓是一種由遺傳和環(huán)境因素共同作用的多基因遺傳疾病，研究證實高血壓有明顯的遺傳傾向，人群中個體間20%-60%的血壓水平變異歸因于遺傳因素。隨著單核苷酸多態(tài)性研究的深入，科研工作者發(fā)現(xiàn)了多個與高血壓易感性密切相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性位點。人體內(nèi)水鈉代謝平衡在血壓調(diào)控和高血壓發(fā)病及防治中發(fā)揮著重要的作用，其中，α-內(nèi)收蛋白（α-adducin，ADD1）基因是一種細胞骨架蛋白，含有多個與膜蛋白相互作用的位點，ADD1蛋白能參與細胞信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)，同時其與鈉鉀泵ATP酶α2亞基之間也相互作用，共同參與細胞膜離子轉(zhuǎn)運。

ADD1有關(guān)位點的多態(tài)可引起鹽離子的代謝紊亂，其中，位點rs4961的多態(tài)性與鈉離子濃度變化具有顯著相關(guān)性，且與人體血壓調(diào)節(jié)密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)rs4961位點等位基因T的攜帶者在相同的環(huán)境中具有更高的易感性。因此，建立簡單、快捷的高血壓易感基因ADD1多態(tài)性位點的檢測方法，通過對單核苷酸多態(tài)性進行基因分型，篩選與高血壓相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性，從遺傳學水平為高血壓危險因素的預(yù)測和防治提供思路，使人們可以通過對健康人群或早期出現(xiàn)高血壓危險因素群體的基因多態(tài)性分型，及時預(yù)測和評價高血壓疾病風險，為高血壓疾病的早期預(yù)防和及時治療提供理論的指導(dǎo)。

目前，基因多態(tài)性檢測最常用的方法為測序法，測序法優(yōu)勢是可以同時進行高通量多位點的檢測，但其操作復(fù)雜耗時長且靈敏度低，容易出現(xiàn)樣本間交叉污染且不能實現(xiàn)樣本的快速檢測；高分辨率溶解曲線法快速、簡便、經(jīng)濟實用，但是它對儀器要求高，其使用的分析儀器即需要安裝高分辨率軟件且需對溫度高度敏感，臨床推廣存在困難。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供重復(fù)性好、靈敏度高的進行ADD1基因rs4961位點多態(tài)性的分型檢測方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

進行ADD1基因rs4961位點多態(tài)性的分型檢測方法，采用ADD1基因特異性的引物SEQ1和SEQ2擴增ADD1基因片段，同時在ADD1基因特異性的引物界定的擴增區(qū)域內(nèi)設(shè)計ADD1基因特異性TAQman探針SEQ3-FAM-T和SEQ4-VIC-G；若位點為T，則ADD1基因特異性TAQman探針SEQ3-FAM-T釋放FAM熒光信號而被定量PCR儀器檢測確認位點為T；若位點為G，則ADD1基因特異性TAQman探針SEQ4-VIC-G釋放VIC熒光信號而被定量PCR儀器檢測確認位點為G，最終通過FAM/VIC信號的比值來判斷位點基因型；

所述ADD1基因特異性的引物SEQ1的核苷酸序列號如下：

5′-CCCACTCAGACACAGTTTT-3′；

所述ADD1基因特異性的引物SEQ2的核苷酸序列號如下：

5′-ACACCTTAGTCTTCGACTTG-3′；

所述ADD1基因特異性TAQman探針SEQ3-FAM-T的核苷酸序列號如下：

FAM-5′-CTGCTTCCATTCTGCCATTC-3′-MGB；

所述ADD1基因特異性TAQman探針SEQ4-VIC-G的核苷酸序列號如下：

VIC-5′-TGCTTCCATTCTGCCCTTC-3′-MGB。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明是基于基因特異性PCR結(jié)合TAQman探針判斷基因SNP位點分型靠的方法，本發(fā)明采用ADD1特異性的基因擴增和TAQman探針，基于TAQman探針定量PCR方法進行目的基因分型檢測具有簡便快捷，重復(fù)性高，靈敏度高，特異性好的特點。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例中人ADD1基因rs4961位點TT基因型特異性片段擴增曲線示意圖。

圖2為本發(fā)明實施例中人ADD1基因rs4961位點GT基因型特異性片段擴增曲線示意圖。

圖3為本發(fā)明實施例中人ADD1基因rs4961位點GG基因型特異性片段擴增曲線示意圖。