[發明專利]等離子體處理靈芝孢子以提高三萜和多糖釋放量的方法

在審

• 申請號: 201710418338.2
• 申請日: 2017-06-06
• 公開（公告）號: CN107242542A
• 公開（公告）日: 2017-10-13
• 發明（設計）人: 黃青;馬玉涵;何華奇;姚國華
• 申請（專利權）人: 中國科學院合肥物質科學研究院
• 主分類號: A23L31/00
• 分類號: A23L31/00;A23L5/30;G01N21/31
• 代理公司: 合肥市浩智運專利代理事務所(普通合伙)34124
• 代理人: 王志興

1.一種等離子體處理靈芝孢子以提高三萜和多糖釋放量的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)靈芝孢子粉的預處理；

(2)等離子體放電處理過程；

(3)處理后靈芝孢子粉中靈芝三萜釋放量對比檢測；

(4)處理后靈芝孢子粉中靈芝多糖釋放量對比檢測。

2.根據權利要求1所述的等離子體處理靈芝孢子以提高三萜和多糖釋放量的方法，其特征在于，所述步驟(1)中靈芝孢子粉的預處理方法為：收集優良菌種的靈芝孢子，利用無菌水清洗；2000-5000rpm離心后，留取沉淀的靈芝孢子。

3.根據權利要求1所述的等離子體處理靈芝孢子以提高三萜和多糖釋放量的方法，其特征在于，所述步驟(2)中進行等離子體放電處理前，對步驟(1)所得的靈芝孢子進行分散處理。

4.根據權利要求3所述的等離子體處理靈芝孢子以提高三萜和多糖釋放量的方法，其特征在于，所述分散處理具體方法為：將步驟(1)所得的靈芝孢子注入玻璃平皿表面，用滅菌后的玻璃涂棒在表面涂布均勻，保證玻璃平皿內液體厚度不超過1mm；超凈臺中完全風干后，用滅菌后的玻璃涂棒將玻璃平皿中表面不平的位置涂抹平整。

5.根據權利要求1所述的等離子體處理靈芝孢子以提高三萜和多糖釋放量的方法，其特征在于，所述步驟(2)中等離子體放電處理過程的進行采用等離子體放電裝置進行，具體方法為：采用低氣壓介質阻擋放電，處理時，將步驟(1)所得的靈芝孢子平鋪于等離子體放電裝置的無菌玻璃平皿中，置于反應腔室內，反應腔室通抽氣泵抽氣而保持2000pa以下的氣壓，同時控制通入放電氣體作為擊穿氣體，放電電壓為1.5-2kV，在200-600瓦功率范圍條件下，處理5-10min。

6.根據權利要求5所述的等離子體處理靈芝孢子以提高三萜和多糖釋放量的方法，其特征在于，所述放電氣體具體為空氣、氮氣、氦氣和氬氣中的一種。

7.根據權利要求1所述的等離子體處理靈芝孢子以提高三萜和多糖釋放量的方法，其特征在于，所述步驟(3)中靈芝三萜釋放量對比檢測過程具體采用高氯酸-香草醛法測定。

8.根據權利要求7所述的等離子體處理靈芝孢子以提高三萜和多糖釋放量的方法，其特征在于，所述高氯酸-香草醛法測定靈芝孢子中靈芝三萜釋放量對比檢測的具體方法為：

(1)齊墩果酸測定應用液的配制：取齊墩果酸對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，即得；

(2)標準曲線的制定：量取齊墩果酸對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL，分別置于具塞試管中，揮干，放冷，加入新配制的香草醛冰醋酸溶液0.2mL、高氯酸0.8mL，搖勻，在65-75℃水浴中加熱12-18分鐘，立即置冰浴中冷卻4-6分鐘，取出，加入乙酸乙酯4mL，搖勻，以相應試劑為空白，依照紫外-可見分光光度法，在546nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線；

(3)供試品溶液的制備：取本品粉末0.01g，置具塞錐形瓶中，加乙醇2mL，超聲處理25-35分鐘，量取供試品溶液0.2mL，置具塞試管中，置于通風櫥中，放冷，加入新配制的香草醛冰醋酸溶液0.2mL、高氯酸0.8mL，搖勻，在65-75℃水浴中加熱12-18分鐘，立即置冰浴中冷卻4-6分鐘，取出，加入乙酸乙酯4mL，搖勻，以相應試劑為空白，依照紫外-可見分光光度法，在546nm波長處測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中齊墩果酸的含量，根據上述制備的標準曲線計算，即得。

9.根據權利要求1所述的等離子體處理靈芝孢子以提高三萜和多糖釋放量的方法，其特征在于，所述步驟(4)中靈芝多糖釋放量對比檢測過程具體采用硫酸-蒽酮法。

10.根據權利要求9所述的等離子體處理靈芝孢子以提高三萜和多糖釋放量的方法，其特征在于，所述硫酸-蒽酮法測定靈芝孢子中靈芝多糖釋放量對比檢測的具體方法為：

(1)對照品溶液的制備：取無水葡萄糖對照品，加水制成每1mL含0.12mg的溶液，即得；

(2)標準曲線的制備：量取對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL，分別置于具塞試管中，各加水至2.0mL，迅速加入硫酸蒽酮溶液6mL，立即搖勻，放置12-18分鐘后，立即置冰浴中冷卻12-18分鐘，取出，以相應的試劑為空白，依照紫外-可見分光光度法，在625nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線；

(3)供試品溶液的制備：取本品粉末0.01g，加水2mL，于離心管中靜置0.8-1.2小時，75-85℃水浴加熱2-4小時，待測；量取供試品溶液1.5mL，加水至2.0mL，迅速加入硫酸蒽酮溶液6mL，立即搖勻，放置12-18分鐘后，立即置冰浴中冷卻12-18分鐘，取出，以相應的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在625nm波長處測定吸光度，從標準曲線上讀取供試品溶液中無水葡萄糖的含量，計算，即得。