[發明專利]奶牛PAG1檢測試紙條及其制備方法

有效

• 申請號: 201710416140.0
• 申請日: 2017-06-06
• 公開（公告）號: CN107219368B
• 公開（公告）日: 2019-02-26
• 發明（設計）人: 赫小燕;張昱;賀俊平;王海東;曹校瑞;牛姝
• 申請（專利權）人: 山西農業大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558
• 代理公司: 太原華弈知識產權代理事務所 14108
• 代理人: 李毅

1.一種奶牛PAG1檢測試紙條，包括底板，以及粘貼在底板上的上樣墊、膠體金墊、NC膜和吸樣墊，在所述NC膜上設置有檢測線和質控線，所述NC膜的檢測線端依次疊加粘貼有膠體金墊和上樣墊，質控線端疊加粘貼吸樣墊，其特征是在所述膠體金墊上包被有PAG1單克隆抗體，NC膜的檢測線上包被anti PAG1重組抗原，質控線上包被羊抗鼠IgG抗體，所述PAG1單克隆抗體是氨基酸序列為NNIHRLIGAIPRGSEHYVPCSEVNT的奶牛PAG1多肽的單克隆抗體。

2.權利要求1所述奶牛PAG1檢測試紙條的制備方法，包括以下步驟：

1) 以氯金酸-檸檬酸鈉還原法制備膠體金溶液，向每1mL膠體金溶液中加10μL0.11mol/L碳酸鉀溶液調節膠體金溶液的pH值；

2) 在每1mL膠體金溶液中加入5～10μg PAG1單克隆抗體，搖勻后靜置5min，用BSA溶液封閉；沉淀出膠體金標記的抗體復合物，以膠體金稀釋液洗滌沉淀，并用膠體金稀釋液稀釋至原體積的1/10，得到膠體金標記PAG1單克隆抗體溶液；

3) 取NC膜固定在底板上，將稀釋的anti PAG1重組抗原和羊抗鼠IgG抗體分別作為檢測線和質控線包被在NC膜上，干燥保存；

4) 取聚酯纖維膜置于噴金劃膜儀的工作臺上，將膠體金標記PAG1單克隆抗體溶液均勻噴涂于聚酯纖維膜上，干燥制成膠體金墊；

5) 在玻璃纖維膜上均勻涂上玻纖處理液，干燥后制成上樣墊；

6) 在固定有NC膜的底板上NC膜檢測線端依次疊加粘貼膠體金墊和上樣墊，質控線端粘貼吸樣墊。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征是將所述膠體金標記PAG1單克隆抗體溶液以5μL/cm²均勻噴涂于聚酯纖維膜上。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征是所述用于包被檢測線的anti PAG1重組抗原的濃度為1.5～2.5mg/mL。

5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征是所述用于包被質控線的羊抗鼠IgG抗體的濃度為1.5～2.5mg/mL。

6.根據權利要求2所述的制備方法，其特征是所述的BSA溶液封閉是在每1mL膠體金溶液中加入20μL 10%BSA溶液，混勻后靜置5min。

7.根據權利要求2所述的制備方法，其特征是所述的底板為聚氯乙烯板。

8.根據權利要求2所述的制備方法，其特征是所述的NC膜為硝酸纖維素膜。