[發明專利]一種快速分析蜂花粉中脂類成分的方法

有效

• 申請號: 201710415148.5
• 申請日: 2017-06-05
• 公開（公告）號: CN107389847B
• 公開（公告）日: 2020-01-07
• 發明（設計）人: 王凱;李強強;吳黎明;薛曉鋒
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蜜蜂研究所
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89
• 代理公司: 11002 北京路浩知識產權代理有限公司
• 代理人: 王文君

1.一種快速分析蜂花粉中脂類成分的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)樣品預處理

稱取蜂花粉，研磨粉碎后加入花粉脂質提取液，渦旋、靜置后離心，靜置，分層后取下層有機相；所述花粉脂質提取液為氯仿與甲醇按體積比2:1的混合溶液；并按花粉和氯仿甲醇混合液比，即料液比1:4～1:8加入；

向有機相加入去離子水，萃取渦旋，靜置，抽提后離心，取下層有機相，氮氣吹干，得到透明薄膜，重溶于花粉脂質提取液，待測；

(2)利用UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技術對樣品進行定性和定量分析；

超高效反相液相色譜的流動相包括：A組分乙腈和水，B組分異丙醇和乙腈；

所述超高效反相液相色譜的梯度洗脫為：

0-20min，A組分由63％降至2％，B組分由體積百分比37％增至98％；

20-28min；按體積百分比計：2％A，98％B；

28-28.1min，A組分由體積百分比2％降升至63％，B組分由體積百分比98％降至37％；

28.1-35min；按體積百分比計，63％A，37％B；洗脫速度為150-300μL/min；

進樣量：1-2μL；

所述超高效反相液相色譜的其他檢測條件：

采集模式：正、負離子采集模式；

離子源：電噴霧離子源；溫度：200-350℃；

掃描方式：數據依賴型二級掃描；

碰撞能量：10-50eV；

色譜柱：反相色譜柱；

進樣量：1-2μL；

毛細管溫度：200-350℃；噴霧電壓：2-3.0kV；鞘氣流速：30-35Arb；輔助氣流速：0-10Arb；

采集范圍：正離子模式下240-2000m/z，負離子模式下200-2000m/z；

(3)利用軟件Lipidsearch 4.0進行數據分析，基于一級母離子和二級碎片離子信息進行數據庫檢索，自動匹配保留時間，準確質量數，鑒定樣品中的脂類成分；再根據標準溶液濃度曲線定量分析樣品中脂類成分的含量；

所述脂類成分為：神經酰胺、溶血性卵磷脂、甘油三酯、甘油二酯、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰絲氨酸和脂肪酸。

2.根據權利要求1所述的快速分析蜂花粉中脂類成分的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述超高效反相液相色譜的流動相包括：A組分乙腈和水，按體積百分比計60:40，含10mM乙酸胺；B組分異丙醇和乙腈，按體積百分比計90:10，含10mM乙酸胺。