[發(fā)明專利]一種快速分析蜂花粉中脂類(lèi)成分的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710415148.5
• 申請(qǐng)日: 2017-06-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107389847B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王凱;李強(qiáng)強(qiáng);吳黎明;薛曉鋒
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/89
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/89
• 代理公司: 11002 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 王文君

本發(fā)明涉及一種快速分析蜂花粉中脂類(lèi)成分的方法。利用超高效反相液相色譜與四級(jí)桿?靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC?Q?Exactive Orbitrap MS)，并利用正負(fù)離子監(jiān)測(cè)模式、全掃描及自動(dòng)觸發(fā)二級(jí)質(zhì)譜掃描的功能，準(zhǔn)確實(shí)現(xiàn)不同植物來(lái)源蜂花粉中脂類(lèi)物質(zhì)的精確定量，為蜂花粉產(chǎn)地溯源、真實(shí)性判別、摻雜打假以及蜂花粉的功能營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究提供依據(jù)。該技術(shù)分辨率高，定性準(zhǔn)確，克服了以往技術(shù)在成分鑒別中準(zhǔn)確度和可靠性低的問(wèn)題，是一種脂質(zhì)組學(xué)分析的新型高效技術(shù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于化學(xué)分析領(lǐng)域，具體涉及一種快速分析蜂花粉中脂類(lèi) 成分的方法。

背景技術(shù)

脂類(lèi)，又稱脂質(zhì)，這是一類(lèi)不溶于水而易溶于脂肪溶劑(醇、醚、 氯仿、苯)等非極性有機(jī)溶劑，由脂肪酸與醇作用脫水縮合生成的酯 及其衍生物統(tǒng)稱為脂類(lèi)，其中包括脂肪、蠟、類(lèi)固醇、脂溶性維生素 (如維生素A，D，E和K)、單酸甘油酯、二酸甘油酯、磷脂等。它的主要生理功能包括儲(chǔ)存能量、構(gòu)成細(xì)胞膜以及膜的訊息傳導(dǎo)等。如 今，脂類(lèi)已經(jīng)被用于美容和食品工業(yè)。脂質(zhì)根據(jù)其雙親性的特質(zhì)(兼 具親水性與疏水性)可以概分為八類(lèi)：脂肪酸、甘油酯、甘油磷脂、 鞘脂(神經(jīng)脂質(zhì))、糖脂質(zhì)、聚酮類(lèi)(由酮乙基次單元聚合而成)、固醇脂類(lèi)，以及孕烯醇酮脂類(lèi)(由異戊二烯次單元縮合聚合而成)。

蜂花粉是指蜜蜂采蜜時(shí)帶回的花粉團(tuán)，在蜂巢內(nèi)經(jīng)過(guò)儲(chǔ)藏和發(fā)酵 后形成的不規(guī)則扁圓形的團(tuán)狀物。蜂花粉中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生 物學(xué)活性物質(zhì)，具有保護(hù)心血管系統(tǒng)、促進(jìn)機(jī)體免疫力、清除自由基、 調(diào)節(jié)腸道功能和治療前列腺疾病等。蜂花粉含有蛋白質(zhì)、必需氨基酸、 多糖、維生素、不飽和脂肪酸、多酚類(lèi)和黃酮類(lèi)等活性物質(zhì)，越來(lái)越 多地被應(yīng)用于食品和醫(yī)療工業(yè)。

蜂花粉中的脂類(lèi)成分在其營(yíng)養(yǎng)成分中占據(jù)重要地位，并且不同種 類(lèi)的蜂花粉中脂類(lèi)成分的組成和含量也是不同的。近些年，蜂花粉中 的脂類(lèi)成分越來(lái)越受到國(guó)內(nèi)外研究人員的廣泛關(guān)注。其中，大多數(shù)實(shí) 驗(yàn)集中于花粉中脂肪酸的研究。脂肪酸的種類(lèi)繁多，常見(jiàn)的脂肪酸有 丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、花 生酸、山崳酸、二十四酸、油酸、棕櫚酸、芥子酸、亞油酸、花生四 稀酸和神經(jīng)酸等。目前，已在花粉中發(fā)現(xiàn)了亞油酸、亞麻酸、花生四 烯酸等多不飽和脂肪酸。除脂肪酸外，不同種類(lèi)的花粉中所含的脂種 類(lèi)及含量也是不同的，蜂花粉中除脂肪酸外的其他脂類(lèi)成分報(bào)道并不 充分。

現(xiàn)有蜂花粉中脂質(zhì)組分的常用檢測(cè)方法包括薄層層析法，氣相色 譜法，氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法或反相液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(利用的是 大氣壓化學(xué)電離源)。但現(xiàn)有方法分辨率和靈敏度低，不可以消除干 擾，無(wú)法實(shí)現(xiàn)可靠的代謝物結(jié)構(gòu)識(shí)別，完成不了大規(guī)模脂類(lèi)組學(xué)樣品 分析。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種蜂花粉中脂類(lèi)成分的檢 測(cè)方法，其利用超高效反相液相色譜與四級(jí)桿-靜電場(chǎng)軌道阱高分辨 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC-Q-ExactiveOrbitrap MS)，并利用正負(fù)離子監(jiān) 測(cè)模式、全掃描及自動(dòng)觸發(fā)二級(jí)質(zhì)譜掃描的功能，準(zhǔn)確實(shí)現(xiàn)不同植物 來(lái)源蜂花粉中脂類(lèi)物質(zhì)的精確定量，為蜂花粉產(chǎn)地溯源、真實(shí)性判別、 摻雜打假以及蜂花粉的功能營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究提供依據(jù)。該技術(shù)分辨率高， 定性準(zhǔn)確，克服了以往技術(shù)在成分鑒別中準(zhǔn)確度和可靠性低的問(wèn)題， 是一種脂質(zhì)組學(xué)分析的新型高效技術(shù)。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種快速分析蜂花粉中脂類(lèi)成分的方法，包括如下步驟：

(1)樣品預(yù)處理

稱取蜂花粉，研磨粉碎后加入花粉脂質(zhì)提取液，渦旋、靜置后離 心，靜置，分層后取下層有機(jī)相；向有機(jī)相加入去離子水，萃取渦旋， 靜置，抽提后離心，取下層有機(jī)相，氮?dú)獯蹈桑玫酵该鞅∧ぃ厝?于花粉脂質(zhì)提取液，待測(cè)；

(2)利用UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技術(shù)對(duì)樣品進(jìn)行定性和 定量分析；