[發(fā)明專利]革蘭氏陰性菌陽性血培養(yǎng)分離膠及化學(xué)試劑前處理方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710414324.3
• 申請日: 2017-06-05
• 公開（公告）號: CN107236782A
• 公開（公告）日: 2017-10-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊啟文;周夢蘭;徐英春
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙)11419
• 代理人: 何自剛

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及革蘭氏陰性菌陽性血培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種革蘭氏陰性菌陽性血培養(yǎng)分離膠及化學(xué)試劑前處理方法。

背景技術(shù)

現(xiàn)有的革蘭氏陰性菌陽性血培養(yǎng)的鑒定方法是：血培養(yǎng)儀陽性報警后按傳統(tǒng)流程處理，涂片革蘭染色、顯微鏡觀察、轉(zhuǎn)種血或巧克力平板在厭氧或需氧條件下培養(yǎng)24-48h獲得純菌落后，再使用現(xiàn)有的基于生化反應(yīng)或免疫學(xué)方法的商品化儀器如Vitek 2Compact、API 20C和BD Phoenix^TM-100等進(jìn)行鑒定。

但是目前這樣的方法需要將陽性血培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種至培養(yǎng)基上，培養(yǎng)孵育至肉眼可見的單個純菌落后，再挑選單個純菌落通過后續(xù)的方法進(jìn)行鑒定，整個過程耗時較長(約24h-48h)。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種革蘭氏陰性菌陽性血培養(yǎng)分離膠及化學(xué)試劑前處理方法，有效避免了現(xiàn)有技術(shù)中整個過程耗時長的缺陷。

為了克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明提供了一種革蘭氏陰性菌陽性血培養(yǎng)分離膠及化學(xué)試劑前處理方法的解決方案，具體如下：

一種革蘭氏陰性菌陽性血培養(yǎng)分離膠及化學(xué)試劑前處理方法，具體步驟如下：

步驟1：抽取3.5ml血培養(yǎng)陽性液至3.5ml分離膠管中；

步驟2：把分離膠管放置到離心機(jī)中，離心機(jī)在離心力的作用下離心10min；

步驟3：在勿碰觸分離膠管中的分離膠的表面菌膜的條件下對血培養(yǎng)陽性液進(jìn)行吸棄上清；

步驟4：用1ml無菌雙蒸水反復(fù)吹吸分離膠表面的菌膜，以此來讓菌膜懸浮在無菌雙蒸水中形成菌懸液；

步驟5：將1ml菌懸液轉(zhuǎn)移至1.5ml EP管中，往EP管中加入200μl且濃度百分比為10％的SDS，把EP管放置在渦旋振蕩儀上進(jìn)行渦旋震蕩1min后，再在室溫的條件下把EP管靜置5min；

步驟6：把EP管放入離心機(jī)中，離心機(jī)在13000rpm的轉(zhuǎn)速的條件下進(jìn)行離心2min，在勿觸碰EP管底的沉淀的條件下吸棄上清；

步驟7：往EP管底的沉淀中加入濃度百分比為75％的乙醇700μl構(gòu)成第一混合物，然后對該第一混合物進(jìn)行吹吸混勻；

步驟8：接著在室溫條件下把該EP管靜置10min；

步驟9：將EP管放入離心機(jī)中，離心機(jī)在13000rpm的轉(zhuǎn)速的條件下進(jìn)行離心2min，在勿觸碰EP管底的沉淀的條件下吸棄上清；

步驟10：繼續(xù)讓離心機(jī)在13000rpm的轉(zhuǎn)速的條件下進(jìn)行離心1min，在勿觸碰EP管底的沉淀的條件下吸棄上清；然后把該EP管放置在生物安全柜中且在室溫條件下靜置5min，吹干EP管內(nèi)的物質(zhì)中的殘留乙醇使得殘留乙醇完全揮發(fā)；

步驟11：往EP管底的沉淀中加入15μl且濃度百分比為70％的甲酸來形成第二混合物，然后對第二混合物進(jìn)行吹吸混勻，再在室溫的條件下把EP管靜置；

步驟12：往EP管中加15μl乙腈來形成第三混合物，然后對第三混合物進(jìn)行吹吸混勻，再把EP管放入離心機(jī)中，離心機(jī)在13000rpm的轉(zhuǎn)速的條件下進(jìn)行離心2min；

步驟13：取1μl EP管中的上清滴于靶板，在室溫條件下把靶板晾干；加1μlα-氰基-4-羥基肉桂酸(CHCA)基質(zhì)，把靶板放入Bruker質(zhì)譜儀中進(jìn)行質(zhì)譜分析。

所述步驟2中的離心機(jī)在離心力的作用下的離心力大小為4000g。

所述步驟4中的用1ml無菌雙蒸水反復(fù)吹吸分離膠表面的菌膜的吹吸次數(shù)為5-10次。

所述步驟11中所述的再在室溫的條件下把EP管靜置的時間為5-10min。

本發(fā)明的有益效果為：

本發(fā)明的革蘭氏陰性菌陽性血培養(yǎng)分離膠的方法不需要將陽性血培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種至培養(yǎng)基上至生長出單個菌落，再通過后續(xù)的方法進(jìn)行鑒定，而是將陽性血培養(yǎng)液進(jìn)行分離膠前處理后直接質(zhì)譜鑒定，整個過程耗時約30-40min，大大縮短了鑒定流程，同時節(jié)約了人力物力。

附圖說明

圖1是本發(fā)明的嵌接設(shè)備的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2是本發(fā)明的第一嵌接部的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖3是本發(fā)明的第二嵌接部的部分截面示意圖；

圖4是本發(fā)明的嵌接設(shè)備的剖視圖。

具體實施方式

下面將結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步地說明。

實施例1

革蘭氏陰性菌陽性血培養(yǎng)分離膠及化學(xué)試劑前處理方法，具體步驟如下：

步驟1：抽取3.5ml血培養(yǎng)陽性液至3.5ml分離膠管中；