[發明專利]革蘭氏陰性菌陽性血培養分離膠及化學試劑前處理方法

在審

• 申請號: 201710414324.3
• 申請日: 2017-06-05
• 公開（公告）號: CN107236782A
• 公開（公告）日: 2017-10-10
• 發明（設計）人: 楊啟文;周夢蘭;徐英春
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院北京協和醫院
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙)11419
• 代理人: 何自剛

1.一種革蘭氏陰性菌陽性血培養分離膠及化學試劑前處理方法，其特征在于，具體步驟如下：

步驟1：抽取3.5ml血培養陽性液至3.5ml分離膠管中；

步驟2：把分離膠管放置到離心機中，離心機在離心力的作用下離心10min；

步驟3：在勿碰觸分離膠管中的分離膠的表面菌膜的條件下對血培養陽性液進行吸棄上清；

步驟4：用1ml無菌雙蒸水反復吹吸分離膠表面的菌膜，以此來讓菌膜懸浮在無菌雙蒸水中形成菌懸液；

步驟5：將1ml菌懸液轉移至1.5ml EP管中，往EP管中加入200μl且濃度百分比為10％的SDS，把EP管放置在渦旋振蕩儀上進行渦旋震蕩1min后，再在室溫的條件下把EP管靜置5min；

步驟6：把EP管放入離心機中，離心機在13000rpm的轉速的條件下進行離心2min，在勿觸碰EP管底的沉淀的條件下吸棄上清；

步驟7：往EP管底的沉淀中加入濃度百分比為75％的乙醇700μl構成第一混合物，然后對該第一混合物進行吹吸混勻；

步驟8：接著在室溫條件下把該EP管靜置10min；

步驟9：將EP管放入離心機中，離心機在13000rpm的轉速的條件下進行離心2min，在勿觸碰EP管底的沉淀的條件下吸棄上清；

步驟10：繼續讓離心機在13000rpm的轉速的條件下進行離心1min，在勿觸碰EP管底的沉淀的條件下吸棄上清；然后把該EP管放置在生物安全柜中且在室溫條件下靜置5min，吹干EP管內的物質中的殘留乙醇使得殘留乙醇完全揮發；

步驟11：往EP管底的沉淀中加入15μl且濃度百分比為70％的甲酸來形成第二混合物，然后對第二混合物進行吹吸混勻，再在室溫的條件下把EP管靜置；

步驟12：往EP管中加15μl乙腈來形成第三混合物，然后對第三混合物進行吹吸混勻，再把EP管放入離心機中，離心機在13000rpm的轉速的條件下進行離心2min；

步驟13：取1μl EP管中的上清滴于靶板，在室溫條件下把靶板晾干；加1μlα-氰基-4-羥基肉桂酸(CHCA)基質，把靶板放入Bruker質譜儀中進行質譜分析。

2.根據權利要求1所述的革蘭氏陰性菌陽性血培養分離膠及化學試劑前處理方法，其特征在于，所述步驟2中的離心機在離心力的作用下的離心力大小為4000g。

3.根據權利要求1所述的革蘭氏陰性菌陽性血培養分離膠及化學試劑前處理方法，其特征在于，所述步驟4中的用1ml無菌雙蒸水反復吹吸分離膠表面的菌膜的吹吸次數為5-10次。

4.根據權利要求1所述的革蘭氏陰性菌陽性血培養分離膠及化學試劑前處理方法，其特征在于，所述步驟11中所述的再在室溫的條件下把EP管靜置的時間為5-10min。