[發明專利]一種降低最低檢出限檢測牛奶中β?內酰胺酶殘留的方法在審
| 申請號： | 201710413671.4 | 申請日： | 2017-06-05 |
| 公開（公告）號： | CN107247115A | 公開（公告）日： | 2017-10-13 |
| 發明（設計）人： | 張俊杰;李濱;徐潔;張磊;李兵;段蕊 | 申請（專利權）人： | 淮海工學院;連云港市新希望乳業有限公司 |
| 主分類號： | G01N31/16 | 分類號： | G01N31/16 |
| 代理公司： | 南京縱橫知識產權代理有限公司32224 | 代理人： | 何文豪 |
| 地址： | 222000 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 降低 最低 檢出 檢測 牛奶 內酰胺 殘留 方法 | ||
1.一種降低最低檢出限檢測牛奶中β-內酰胺酶殘留的方法，其特征在于：利用pH計法做單因素試驗確定酶最適反應溫度、酶反應最適底物濃度、酶反應最適反應時間，再進行酸堿滴定法檢測樣品中β-內酰胺酶含量，并檢測出最低檢出限。
2.根據權利要求1所述的一種降低最低檢出限檢測牛奶中β-內酰胺酶殘留的方法，其特征在于：所述酸堿滴定法具體包括如下步驟：
(1)用無抗奶粉和50℃-100℃溫水以1：6至1:10的比例配置成牛奶，冷卻至室溫后分別裝入五組錐形瓶，每組5-10ml；
(2)向步驟(1)中的錐形瓶中分別加入濃度為0.01-1g/ml的青霉素儲備液和濃度為1-10U/μl的β-內酰胺酶儲備液，震蕩均勻；
(3)將步驟(2)中的錐形瓶以保鮮膜封口并置于酶最適反應溫度水浴鍋中水浴，水浴完成后以沸水浴滅菌5-20s；
(4)滅菌后向錐形瓶中加入指示劑，震蕩均勻并觀察顏色變化，以NaOH進行滴定，記錄滴定數據；
(5)根據滴定數據計算產酸速度和酶濃度。
3.根據權利要求2所述的一種降低最低檢出限檢測牛奶中β-內酰胺酶殘留的方法，其特征在于：所述步驟(4)滴定時NaOH濃度為0.001-0.005mol/L或0.010-0.015mol/L，滴定量為8ml—12ml。
4.根據權利要求2所述的一種降低最低檢出限檢測牛奶中β-內酰胺酶殘留的方法，其特征在于：所述步驟收(3)中指示劑為甲基紅指示劑，用量為1-10滴。
5.根據權利要求1所述的一種降低最低檢出限檢測牛奶中β-內酰胺酶殘留的方法，其特征在于：所述步驟(2)中五組錐形瓶中β-內酰胺酶儲備液用量為0μl、3μl、4μl、5μl、6μl。
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