[發明專利]獲得與低分子含氮有機化合物特異性結合的適配體的方法

在審

• 申請號: 201710412759.4
• 申請日: 2017-06-05
• 公開（公告）號: CN108118060A
• 公開（公告）日: 2018-06-05
• 發明（設計）人: 小野寺真里
• 申請（專利權）人: 松下知識產權經營株式會社
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C12N15/10
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 曾禎;段承恩

1.一種獲得與低分子含氮有機化合物特異性地結合的適配體的方法，該方法具備以下工序：

工序(a)，制備含有所述低分子含氮有機化合物和DNA文庫的水溶液，

工序(b)，通過使用電滲流抑制毛細管的電泳將所述水溶液分級，得到含有復合物的級分，所述復合物包含所述DNA文庫所含的單鏈DNA和所述低分子含氮有機化合物，和

工序(c)，通過PCR法擴增所述復合物所含的單鏈DNA，將所述擴增而得的單鏈DNA作為所述與低分子含氮有機化合物特異性地結合的適配體獲得。

2.根據權利要求1所述的方法，進一步具備以下工序：

工序(d)，將工序(c)中獲得的與低分子含氮有機化合物特異性地結合的適配體進行純化的工序。

3.根據權利要求2所述的方法，

在工序(c)中的PCR法中，使用被選自生物素和抗生蛋白鏈菌素中的一方修飾的引物，

在工序(c)中的PCR法中，不僅擴增所述單鏈DNA，還擴增由所述單鏈DNA的互補序列構成的互補鏈，

所述擴增而得的互補鏈被所述選自生物素和抗生蛋白鏈菌素中的一方修飾，并且

工序(d)具備以下子工序：

子工序(da1)，將表面具有選自生物素和抗生蛋白鏈菌素中的另一方的磁珠、與所述擴增而得的單鏈DNA和所述擴增而得的互補鏈混合，通過生物素與抗生蛋白鏈菌素的結合而使所述擴增而得的互補鏈結合在所述磁珠的表面，

子工序(da2)，利用磁力來吸引所述磁珠，

其中，在所述子工序(da2)中，

所述擴增而得的互補鏈和所述擴增而得的單鏈DNA彼此雜交而得的雙鏈DNA與磁珠的表面結合，并且

所述擴增而得的互補鏈通過生物素與抗生蛋白鏈菌素的結合而結合在所述磁珠的表面，

子工序(da3)，回收所述磁珠，和

子工序(da4)，從結合在所述回收而得的磁珠的表面的所述雙鏈DNA分離所述擴增而得的單鏈DNA，將所述擴增而得的單鏈DNA作為所述與低分子含氮有機化合物特異性地結合的適配體進行純化。

4.根據權利要求3所述的方法，

在所述子工序(da4)中，在所述雙鏈DNA中添加堿性水溶液，從而分離所述擴增而得的單鏈DNA。

5.根據權利要求2所述的方法，

工序(d)具備以下子工序：

子工序(db1)，將工序(c)中得到的所述與低分子含氮有機化合物特異性地結合的適配體與低分子含氮有機化合物混合，獲得水溶液，

子工序(db2)，將工序(db1)中得到的水溶液通過使用電滲流抑制毛細管的電泳進行分級，得到含有復合物的級分，所述復合物包含工序(db1)中得到的所述水溶液所含的單鏈DNA和所述低分子含氮有機化合物，和

子工序(db3)，通過PCR法擴增所述工序(db2)中得到的級分所含有的復合物所含的單鏈DNA，將所述擴增而得的單鏈DNA作為所述與低分子含氮有機化合物特異性地結合的適配體進行純化。

6.一種從DNA文庫提取所述DNA文庫所含有的與低分子含氮有機化合物特異性地結合的適配體的方法，該方法具備以下工序：

將含有所述DNA文庫和低分子含氮有機化合物的水溶液通過使用電滲流抑制毛細管的電泳進行分級，獲得含有復合物的級分的工序，所述復合物包含所述DNA文庫所含有的與低分子含氮有機化合物特異性地結合的適配體和所述低分子含氮有機化合物。

7.根據權利要求1所述的方法，

所述低分子含氮有機化合物為可卡因。

8.根據權利要求1所述的方法，

所述低分子含氮有機化合物是選自酞菁、卟啉和它們的衍生物中的1種化合物。