[發明專利]一種用于檢測BRCA1和BRCA2基因大片段重組的引物組合、方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201710412529.8
• 申請日: 2017-06-05
• 公開（公告）號: CN107338285B
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 劉建云;汪彪
• 申請（專利權）人: 北京明諦生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所(普通合伙) 11308
• 代理人: 秦力軍

1.一種用于檢測BRCA1和BRCA2基因大片段重組的引物組合，其特征在于，所述引物組合包括：

從其擴增區段包含BRCA1和BRCA2基因的各個外顯子所在區域的特征片段的多對引物中獲得五組引物；

其中，所述五組引物為：

如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.20所示序列的第一組引物；

如SEQ ID NO.21-SEQ ID NO.44所示序列的第二組引物；

如SEQ ID NO.45-SEQ ID NO.64所示序列的第三組引物；

如SEQ ID NO.65-SEQ ID NO.84所示序列的第四組引物；

如SEQ ID NO.85-SEQ ID NO.104所示序列的第五組引物；

其中，每組引物中從第一個序列開始，每相鄰的兩個序列為一對互為上下游的引物；

其中，所述五組引物是根據混合所述多對引物對BRCA1和BRCA2基因進行多重PCR擴增，并根據擴增片段長度差異及其在BRCA1和BRCA2基因上的分布優化；

其中，所述五組引物中，每組引物中的每對引物所擴增的擴增產物長度均不相同，且每個擴增產物均對應BRCA1和BRCA2基因上的至少一個外顯子區域，從而通過檢測擴增產物的峰高即可獲得BRCA1和BRCA2基因大片段重組的信息。

2.如權利要求1所述的引物，其特征在于，所述五組引物中的每一個引物上均嵌有低退火溫度的通用引物序列。

3.如權利要求2所述的引物，其特征在于，所述通用引物序列如SEQ ID NO.105-SEQ IDNO.106所示。

4.一種應用權利要求1所述的引物組合去檢測非診斷目的的BRCA1和BRCA2基因大片段重組的方法，其特征在于，包括：

利用權利要求1所述的引物組合中的每組引物分別對待測樣本進行多重PCR處理，獲得每組均有多個有明顯長度差異的BRCA1和BRCA2基因的擴增產物的五組產物；

根據所獲得的每組中的多個有明顯長度差異的BRCA1和BRCA2基因的擴增產物的峰高，獲得BRCA1和BRCA2基因大片段重組的信息；

其中，所述權利要求1所述的引物組合通過以下方式獲得：

設計用來分別特異擴增BRCA1和BRCA2基因各個外顯子所在區域特征片段的多對引物；

通過將所述多對引物混合進行多重PCR擴增，得到包括從各個外顯子所在基因區域擴增來的多個擴增片段；

根據所得到多個擴增片段長度，對所述多對引物進行分組，使每組引物中的所有引物對分別對應于不同長度的擴增片段，從而得到五組引物。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述利用五組引物對待測樣本進行多重PCR處理時還使用了低退火溫度的通用引物，如SEQ ID NO.105-SEQ ID NO.106所示。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述通用引物的5’端具有熒光修飾。

7.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述多重PCR處理包括三個階段，其中，第二個階段的退火溫度均高于第一階段及第三階段的退火溫度，第一階段的循環數低于第三階段的循環數。

8.一種用于檢測BRCA1和BRCA2基因大片段重組的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的引物組合；

其中，所述引物組合中的每組引物包含多對引物，每對引物的濃度不完全相同。

9.如權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，其還包括用于配合所述引物組合的通用引物，所述通用引物序列如SEQ ID NO.105-SEQ ID NO.106所示。