[發明專利]組織模型的構建方法及應用

在審

• 申請號: 201710412417.2
• 申請日: 2017-06-02
• 公開（公告）號: CN107058220A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 梁麗金;陳琦;楊習鋒;曾晨光
• 申請（專利權）人: 廣州新誠生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/074;C12Q1/02
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)11371
• 代理人: 劉書芝

1.一種組織模型的構建方法，其特征在于，該方法包括將天然軟組織去細胞基質與動物細胞體外共培養得到所述組織模型。

2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述天然軟組織去細胞基質通過預處理，消毒，脫脂，酶處理，去細胞，漂洗和滅菌步驟制得；制得的天然軟組織去細胞基質含有微脈管系統和生物因子微環境；

所述脫脂步驟為將所述天然軟組織置于脫脂劑中2-12h；所述脫脂劑選自三氯甲烷，二氯甲烷，丙酮、二氯乙烷和乙醇中的一種或多種；所述脫脂劑的用量為所述天然軟組織體積的1-30倍；

所述酶處理步驟為將所述天然軟組織置于含有生物酶的生理鹽水或磷酸鹽緩沖溶液中；所述天然軟組織置于含有生物酶的生理鹽水或磷酸鹽緩沖溶液中的時間為1-48h；所述生物酶選自胰蛋白酶、胃蛋白酶或磷脂酶；所述生物酶的濃度為0.1-10wt％；

所述去細胞步驟為將所述天然軟組織置于含有化學去垢劑的生理鹽水或磷酸鹽緩沖溶液中。

3.根據權利要求1或2所述的構建方法，其特征在于，所述天然軟組織包括小腸組織，血管組織，肌肉組織，心臟組織，瓣膜組織，肺組織，脾臟組織，腎臟組織，肝臟組織，胃組織，膽囊組織，脂肪組織，軟骨組織，氣管組織，食道組織，膀胱組織，輸尿管組織，輸卵管組織或子宮組織；所述動物細胞包括全能干細胞，多能干細胞，專能干細胞，免疫細胞，軟骨細胞，骨來源細胞，平滑肌細胞，骨骼肌細胞，心肌細胞，肝細胞，肝來源的干細胞或祖細胞，肝巨噬細胞，星狀細胞，上皮細胞，腫瘤細胞，神經細胞，血管細胞，內皮細胞或成纖維細胞。

4.根據權利要求3所述的構建方法，其特征在于，該方法具體包括：

a.取滅菌后的天然軟組織去細胞基質置于培養皿中；

b.將含有動物細胞的培養基懸濁液注入培養皿中；

c.將培養皿放置于培養箱中3-6小時后，繼續添加培養基；

d.將動物細胞與天然軟組織去細胞基質共培養3-30天得到所述組織模型，共培養期間每48小時將培養基完全更換一次。

5.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于，步驟a中所述培養皿為24孔板；所述培養皿中預先涂覆纖維連接蛋白；所述天然軟組織去細胞基質的厚度為0.05-2mm。

6.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于，所述步驟b中，所述動物細胞的培養基懸濁液中動物細胞的濃度為20000-500000個/mL；注入培養皿中的所述動物細胞的培養基懸濁液的液面高度不小于所述天然軟組織去細胞基質的厚度。

7.根據權利要求6所述的構建方法，其特征在于，注入培養皿中的所述動物細胞的培養基懸濁液的液面高度等于所述天然軟組織去細胞基質的厚度。

8.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于，步驟c中繼續添加的培養基的體積為步驟b中所述動物細胞的培養基懸濁液體積的1-10倍。

9.一種如權利要求1至8任一項所述的構建方法構建的組織模型，其特征在于，所述組織模型為天然軟組織去細胞基質與動物細胞的體外共培養模型。

10.如權利要求9所述的組織模型在檢測藥物的轉運，吸收，和代謝中的應用或在檢測藥物功效和篩選藥物中的應用。