[發明專利]一種快速檢測腦組織EETs的新方法

有效

• 申請號: 201710411759.2
• 申請日: 2017-06-05
• 公開（公告）號: CN107132293B
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發明（設計）人: 朱心紅;王夢瑤;熊文超;朱旻楨;張燕
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 孫鳳俠

1.一種快速檢測腦組織EETs的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)取生物樣品，加入PBS溶液并制成勻漿，所述PBS溶液的加入量為10μl/mg生物樣品；

(2)在勻漿中加入終濃度為0.8nmol/L的sEH抑制劑反式-4-{4-[3-(4-三氟甲氧基-苯基)-脲基]-環己氧基}-苯甲酸，再等比例加入終濃度為20ng/ml的樣品萃取溶劑，震蕩離心后沉淀；所述震蕩時間為10min，所述離心的條件為5000rpm離心1min；所述沉淀溫度為-20℃，沉淀時間為1.5h；

(3)離心取上清過濾，濾液作為待測樣品；

(4)將待測樣品通過Thermo Fisher Scientific TurboFlow在線樣品前處理系統和超高效液相色譜串聯質譜儀進行檢測，即可得出腦組織中EETs的濃度；

其中，步驟(2)所述樣品萃取溶劑包括甲醇、乙腈、乙酸和11,12-EET-d¹¹，其中按體積比，甲醇：乙腈：乙酸＝1:1:0.04％，11,12-EET-d¹¹的終濃度為20ppb；

所述的超高效液相色譜串聯質譜儀的色譜條件：

分析柱：Waters Acquity UPLC BEH C18 column， 規格2.1×150mm,1.7μm；

預柱：美國賽默飛世爾TurboFlow Cyclone P columns， 規格0.5×50mm；

流動相包括：流動相A為0.02％乙酸水、流動相B為乙腈、流動相C為乙腈：異丙醇＝1:1；

流速：0.30ml/min；柱溫：40℃；自動進樣器溫度：4℃；進樣量：20μl；

梯度洗脫程序見表1；

質譜條件：質譜采用選擇反應監測掃描方式和負離子監測模式進行樣品分析；EET和EET內標的電噴霧電壓均為+2000V，-2500V；毛細管溫度：350℃；離子化溫度均為：300℃；鞘氣流速：55Arb；輔助氣流速：12Arb；其他主要質譜條件見表2；掃描時間為10min；

表1梯度洗脫程序

表2 EET和其內標主要質譜條件，Q2代表定量子離子

2.根據權利要求1所述的快速檢測腦組織EETs的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述離心的條件為4℃、14000rpm離心10min。

3.根據權利要求1所述的快速檢測腦組織EETs的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述過濾是使用0.22μm微孔濾膜過濾。