[發明專利]一種功能性地檢測抗體介導的器官排異的方法及其應用與試劑盒

有效

• 申請號: 201710410732.1
• 申請日: 2017-06-04
• 公開（公告）號: CN107219359B
• 公開（公告）日: 2018-12-11
• 發明（設計）人: 石強
• 申請（專利權）人: 石強
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 北京市盈科律師事務所 11344
• 代理人: 程新霞

本發明公開了一種功能性地檢測抗體介導的器官排異的方法及其應用與試劑盒，其涉及生物技術領域。本發明用于確定在接受器官移植的病人體內是否產生了導致慢性器官排斥的抗體，試劑盒用于檢測具有致病性的特異性抗供者抗體。本發明是將器官受者的血清加入與供者組織相容抗原相同的血管內皮細胞培養物內，在攝氏溫度35℃?37℃下培育后測定血管內皮細胞的反應。試驗結果揭示了器官移植受者與供者之間高度特異且精準的相互作用，為早期發現器官排異反應并制定早期治療方案提供了病理學依據。不需活檢材料，為臨床醫師提供了一種定期監視接受器官移植病人的有力、有效且十分經濟的手段。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及一種功能性地檢測抗體介導的器官排異的方法及其應用與試劑盒，用于確定在接受器官移植的病人體內是否產生了導致慢性器官排斥的抗體。

背景技術

外科移植是目前根治器官衰竭最有效的途徑，它不但需要嚴格廣泛的醫療護理，還要求器官供者和受者之間的人類組織相容抗原相同以避免受者的免疫系統攻擊外來的組織。如果二者的人類組織相容抗原類型不同，受者體內天然存在或誘導合成的抗體將攻擊移植的器官組織。然而，在臨床實踐中，器官供者和資源十分限制，供者和受者之間的抗原相同程度變異相當巨大。據報道，8－25％的接受器官移植的病人都會產生針對供者特異的抗體即DSA,其中50％的病人在五年內將出現抗體介導的排斥反應并最終導致器官移植失敗。

然而，不是所有的DSA都能介導排斥反應。雖然DSA的某些特性包括亞型、滴度、特異性、結合力及克隆性與致病性有密切關系，但是目前尚無試驗手段直接觀察DSA與供者血管細胞的相互作用。這是鑒定DSA的致病性的關鍵步驟；DSA與供者細胞的相互作用才是決定器官在受者體內生存時間的決定性因素。

迄今為止，LUMINEX公司生產的單抗原微球是臨床上檢測DSA最常用的方法。它評估的原理是在每個微球上均包被不同的人類白細胞組織相容抗原，它們可特異性地結合病人血內的DSA，從而確定它們的種類和強度。雖然單抗原微球法可以提供DSA在免疫學上的特性，但是，它不能完全確立DSA在介導細胞功能方面的作用。這在一定程度上限制了它在指導臨床醫師決策的應有的價值。

C1q單抗原球檢測法是在臨床中使用的鑒定致病性DSA的試驗。C1q受抗體活化并啟動經典補體激活途徑，其產物C4d沉積在組織中導致細胞毒性溶解，造成移植的器官功能喪失。迄今為止，大量科學研究與臨床結果認為補體激活是急性排斥反應的主要途徑，而慢性排斥反應與非補體途徑的激活更相關。

抗體介導的排斥反應是一個極為復雜包含眾多機制的過程。具有致病性的DSA不但要與血管內皮細胞表面的人類白細胞組織相容抗原緊密結合，而且能進一步觸發細胞內的信號傳導通路，才會造成內皮細胞激活。持續激活的內皮細胞一方面加速釋放炎性因子，另一方面在細胞表面增加粘附蛋白。這些反應的綜合結果是在毛細血管周圍侵潤大量炎性細胞和細胞增殖，進一步發展為血管阻塞，組織壞死。由此可見，精準評估DSA的致病性必須依賴于DSA與血管內皮細胞的相互作用。

綜上所述，慢性抗體介導的排斥反應是當今器官移植醫學首要解決的問題，它不僅增加了病人的經濟負擔，而且令移植的器官在體內不能發揮予期的功能。本發明建立了洞察DSA與血管內皮細胞相互作用的檢測手段；它可特異地，準確地確定DSA的致病性。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的是解決功能性地檢測抗體介導的器官排異方法的試劑盒。

所述再構細胞板的血管內皮細胞培養物均具有確定的人類白細胞組織相容抗原譜。確定抗原的方法是提取血管內皮細胞培養物DNA，使用微量聚合酶鏈式反應試劑盒，美國One Lamda產品，將人類白細胞組織相容抗原分類為：HLA－A，HLA－B，HLA－C，HLA－DR，HLA－DQ，和HLA－DP。將所獲得的細胞抗原的信息儲存在數據庫內；確定抗原的細胞凍存在液氮中備用。