[發明專利]一種用于捕食線蟲絲孢菌分子鑒定的標準基因及其應用

在審

• 申請號: 201710406542.2
• 申請日: 2017-06-02
• 公開（公告）號: CN107190061A
• 公開（公告）日: 2017-09-22
• 發明（設計）人: 張穎;張克勤;張云潤;董建勇;蔣力力
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 云南派特律師事務所53110
• 代理人: 董建國

1.一種捕食線蟲絲孢菌的DNA條形碼標準基因序列，其特征在于核苷酸序列為序列表中序列1所示的DNA分子序列。

2.應用權利要求1所述的標準基因進行捕食線蟲絲孢菌分子鑒定的方法，包括以下4個步驟：

(1) 從樣品菌絲中提取基因組DNA；

(2) 以步驟(1)所提取的基因組DNA為模板，用捕食線蟲絲孢菌COX1通用外引物擴增，再用特異性內引物進行聚合酶鏈式反應；

(3)對步驟(2)擴增得到的DNA產物進行測序；

(4) 將測序結果進行人工拼接和校正，與基因序列表中的捕食線蟲絲孢菌的代表菌株序列SEQ ID NO.1進行同源性比對，若核苷酸差異個數在10個以下，即可將該樣品鑒定為捕食線蟲絲孢菌。

3.根據權利要求2所述的COX1基因通用引物，其特征在于外引物序列為：

正向引物PenF1: 5' GACAAGAAAGGTGATTTTTATCTTC3'；

反向引物AspR1: 5'GGTAATGATAATAATAATAATACAGC3'。

4.根據權利要求2所述的特異引物，其特征在于內引物序列為：

正向引物PenF1-chao: 5' ATGCTAAAGACATTGGTA3'；

反向引物AspR1-chao: 5'ACGTATACCTGGACTTCT3'。

5.根據權利要求2所述聚合酶鏈式反應，其外引物擴增條件為：95℃預變性5min，94℃變性40s，37℃退火55s，如此低溫退火2-3個循環，再將最終退火溫度定格于50℃，55s，72℃延伸1min，如此進行30個循環，最后72℃延伸10min，4℃保存；內引物擴增條件為：95℃預變性5min，94℃變性40s，退火溫度為55℃-50.5℃逐漸降低0.5℃，共計11個循環，最后將退火溫度定格在50℃，25個循環，72℃延伸1min，如此進行30個循環，最后72℃延伸10min，4℃保存。