[發明專利]Anti MUC1 CAR-T細胞及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710406177.5
• 申請日: 2017-06-01
• 公開（公告）號: CN107227299B
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發明（設計）人: 劉未斌
• 申請（專利權）人: 劉未斌
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;C12N15/62;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京同立鈞成知識產權代理有限公司 11205
• 代理人: 陶敏;黃健

本發明提供一種Anti MUC1 CAR?T細胞及其制備方法和應用，所述Anti MUC1 CAR?T細胞在T細胞內表達SCFV–IgD–CD28–OX40–CD3ζ融合蛋白；所述SCFV–IgD–CD28–OX40–CD3ζ融合蛋白中，所述SCFV用于結合所述MUC1蛋白，并且所述SCFV的氨基酸序列為第一序列。該細胞經過對T細胞修飾和改造得到，并且能夠特異性識別和殺傷腺癌，適用于相應腫瘤疾病的預防和治療。

技術領域

本發明涉及一種Anti MUC1 CAR-T細胞及其制備方法和應用，屬于基因修飾細胞及腫瘤治療技術領域。

背景技術

在腫瘤免疫治療方法中，淋巴細胞免疫技術包括細胞因子誘導殺傷細胞、細胞毒性T淋巴細胞和浸潤性T淋巴細胞等在國內外已經用于臨床治療惡性腫瘤，并取得一些臨床療效，但其為非特異性免疫作用，由于腫瘤細胞本身免疫逃逸和抗原隱蔽性，其對體內腫瘤細胞清除還非常有限。嵌合抗原受體基因修飾淋巴細胞技術的出現為臨床治療癌癥提供了新的方向。嵌合抗原受體T細胞(Chimeric antigen receptor T cell,簡稱：CAR-T cell)療法是通過提取患者體內T淋巴細胞，經過體外10至14天的培養改造，通過載體整合進入到正常T細胞基因序列，形成嵌合抗原受體T細胞(CAR-T)。被重新編碼的T細胞就能獲得特異性識別和攻擊殺傷腫瘤細胞的能力，能精確殺傷腫瘤細胞，但又不會傷及正常細胞。由于是誘導、激活自體細胞，因此該療法沒有通常放、化療的毒副反應，也沒有傳統治療中出現的耐藥性。

嵌合抗原受體(Chimeric Antigen Receptor，簡稱：CAR)主要由兩部分構成，一端位于細胞外，能夠特異性識別癌細胞表面的某一抗原；另一端位于細胞內，含有信號激活元件(如T細胞受體的Zeta鏈)，起傳遞信號激活T細胞的作用。這樣表達CAR的T淋巴細胞(CAR-T細胞)就能避免T細胞受體識別靶細胞的限制，從而起到靶向癌細胞的的殺傷作用。目前，CAR-T治療的臨床試驗正在迅速增長，其中大部分是對B細胞惡性腫瘤治療的評估。不同的臨床試驗所采用的CD19CAR-T細胞都報道了顯著的效果，復發性或難治性淋巴細胞白血病的治療能達到60-90％的反應率，一部分患者達到持續的緩解，最長的達到2年,這種免疫治療已經給一些患者帶來了前所未有的效果。除了血液系統腫瘤外，研究者們一直在努力將CAR-T治療擴展到實體瘤,但是，CAR-T治療實體瘤還處于早期階段，還有許多問題需要解決。

Mucin 1是膜結合型粘蛋白家族成員，簡稱MUC1。在正常情況下，MUC1呈低水平表達在乳腺，胰腺，胃腸道，呼吸道及泌尿生殖道的上皮細胞的近管腔面，不能被機體免疫系統識別，其表達特點為極性表達，頂端分布，糖基化豐富。在大多數腺癌、血液系惡性腫瘤中MUC1呈異常過表達，可通過調控多個信號通路調節細胞惡性轉化，是促進腫瘤發生與發展的重要癌基因。由于MUC1在腫瘤細胞中的表達糖基化不全，并失去極性，遍布于整個細胞表面，容易被抗體識別，因此，MUC1蛋白可作為CAR-T細胞抗腫瘤治療的一個理想靶點。

發明內容

本發明提供一種Anti MUC1 CAR-T細胞及其制備方法和應用，該細胞經過T細胞修飾和改造得到，并且能夠特異性識別和殺傷腺癌、血液系惡性腫瘤，適用于相應腫瘤疾病的預防和治療。

本發明提供一種Anti MUC1 CAR-T細胞，所述Anti MUC1 CAR-T細胞在T細胞內表達SCFV–IgD–CD28–OX40–CD3ζ融合蛋白；所述SCFV–IgD–CD28–OX40–CD3ζ融合蛋白中，所述SCFV用于結合所述MUC1蛋白，并且所述SCFV的氨基酸序列為第一序列，所述第一序列為：