[發(fā)明專利]Anti MUC1 CAR-T細(xì)胞及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710406177.5
• 申請日: 2017-06-01
• 公開（公告）號: CN107227299B
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉未斌
• 申請（專利權(quán)）人: 劉未斌
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;C12N15/62;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京同立鈞成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11205
• 代理人: 陶敏;黃健

1.一種Anti MUC1 CAR-T細(xì)胞，其特征在于，所述Anti MUC1 CAR-T細(xì)胞在T細(xì)胞內(nèi)表達(dá)SCFV–IgD–CD28–OX40–CD3ζ融合蛋白；

所述SCFV–IgD–CD28–OX40–CD3ζ融合蛋白中，所述SCFV用于結(jié)合所述MUC1蛋白，并且所述SCFV的氨基酸序列為第一序列，所述第一序列為：

EVQLQQSGGGLVQPGGSMKLSCVASKFTFSNYWMNWVRQSPEKGLEWVAEIRLKSNNYATHYAESVKGRFTISRDDSKSSVYLQMNNLRAEDTGIYYCTFGNSFAYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYSNWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRAPGVPARFSGSKIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWESNHWVFGGGTKLTVLGSE；

所述SCFV–IgD–CD28–OX40–CD3ζ融合蛋白中，所述IgD的氨基酸序列為第二序列，所述CD28的氨基酸序列為第三序列，所述OX40的氨基酸序列為第四序列，所述CD3ζ的氨基酸序列為第五序列；

所述第二序列為：

TFTCFVVGSDLKDAHLTWEVAGKVPTGGVEEGLLERHSNGSQSQHSRLTLPRSLWNAGTSVTCTLAHPSLPPQRLMALREPAAQAPVKLSTNLLASSDPPEAA；

所述第三序列為：

FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSALLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS；

所述第四序列為：

RRDQRLPPDSHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKI；

所述第五序列為：

RVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRSEEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Anti MUC1 CAR-T細(xì)胞，其特征在于，所述SCFV–IgD–CD28–OX40–CD3ζ融合蛋白中，

所述SCFV–IgD–CD28–OX40–CD3ζ融合蛋白的氨基酸序列為第六序列，所述第六序列為：

EVQLVQSGAEVKKPGESLTISCKASGYSFPNYWITWVRQMSGGGLEWMGRIDPGDSYTTYNPSFQGHVTISIDKSTNTAYLHWNSLKASDTAMYYCARYYVSLVDIWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQSVLTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSKVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVNNRPSEVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYKSSYTTGSRAVFGGGTKLTVLGTFTCFVVGSDLKDAHLTWEVAGKVPTGGVEEGLLERHSNGSQSQHSRLTLPRALWNAGTSVTCTLNHPSLPPQRLMALREPAAQAPVKLSLNLLASSDPPEAAFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSAEPPAKQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR。

3.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一所述的Anti MUC1 CAR-T細(xì)胞，其特征在于，所述Anti MUC1CAR-T細(xì)胞通過慢病毒感染T淋巴細(xì)胞獲得，所述慢病毒通過攜帶有所述SCFV–IgD–CD28–OX40–CD3ζ融合蛋白的慢病毒表達(dá)載體感染293T細(xì)胞得到。