[發(fā)明專利]一種通過枝干截面愈傷不定芽再生純化嵌合體獲得純四倍體冬棗植株的方法

在審

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• 申請日: 2017-06-01
• 公開（公告）號: CN107047315A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 尹魁林;王志愛
• 申請（專利權(quán)）人: 濱州市沾化區(qū)冬棗實業(yè)總公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H1/04;A01G17/00;A01G1/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植株的繁育方法，具體涉及一種通過枝干截面愈傷不定芽再生純化嵌合體獲得純四倍體冬棗植株的方法。

背景技術(shù)

棗原產(chǎn)中國，是中國最具特色和優(yōu)勢的果樹樹種之一，栽培面積近3000萬畝，產(chǎn)量多600萬噸，占世界99%。近年來，隨著棗產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，栽培品種結(jié)構(gòu)不斷調(diào)整優(yōu)化，鮮食棗的栽培越來越受到重視。‘冬棗’是目前我國第一大主栽優(yōu)良鮮食棗品種，除了山東沾化以外，在河北、山西和陜西等地也都形成了一定的規(guī)模。但‘冬棗’果個偏小、栽培管理要求高，進(jìn)行‘冬棗’遺傳改良不僅是‘冬棗’，也是當(dāng)前鮮食棗產(chǎn)業(yè)發(fā)展的必然需要。

果樹多倍體常表現(xiàn)出果實巨大性等優(yōu)良性狀，在果樹育種中一直受到高度重視。棗樹的多倍性育種開始于20世紀(jì)70年代末期，但棗樹人工誘變多倍體常常是獲得嵌合體，嵌合體純化仍是棗樹人工多倍體誘變中需要面對的重要問題。當(dāng)前田間大面積種植的‘沾冬2號’是源自‘冬棗’自然變異的倍性嵌合體材料（二、四混倍體），其生長特性不穩(wěn)定，‘冬棗’果實偏小，枝條中每年會出現(xiàn)相當(dāng)比例的二倍體‘冬棗’，并且其抗性低，近幾年凍害嚴(yán)重，這增加了管理難度，降低了收益，嚴(yán)重影響了棗農(nóng)的推廣積極性，限制了該品種的推廣發(fā)展。在棗樹倍性種質(zhì)創(chuàng)新中，已有人工誘變、胚乳培養(yǎng)獲得多倍體的報道，但自然芽變倍性嵌合體的純化研究尚未見報道。能否通過自然芽變倍性嵌合體的純化，純化嵌合體‘沾冬2號’獲得四倍體冬棗，實現(xiàn)‘沾冬2號’的多倍化改良和換代升級，是目前行業(yè)內(nèi)亟需解決的技術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決以上現(xiàn)有技術(shù)中的問題，本發(fā)明創(chuàng)造性的提出一種通過枝干截面愈傷不定芽再生純化嵌合體獲得純四倍體冬棗植株的方法，該方法通過自然芽變倍性嵌合體的純化得到四倍體冬棗植株，無需像離體組培那樣經(jīng)歷過渡培養(yǎng)、溫室栽培、移栽下地等過程，可直接移栽入大田，具有可以進(jìn)行再生材料田間快速評價的優(yōu)勢，提高了‘沾冬2號’的純化效率，加速獲得純四倍體冬棗。

本申請采取的技術(shù)方案如下：

（1）從5月中旬到8月中旬選擇健壯‘沾冬2號’冬棗枝干，進(jìn)行截枝處理，在截面上放一圈脫脂棉覆蓋形成層，用含有細(xì)胞分裂素的藥劑潤濕脫脂棉，用塑料袋包住截口并系緊，12-14h后，去除覆蓋物，并用濕泥覆蓋截口，再覆蓋塑料布系緊保濕，進(jìn)行愈傷組織和叢生芽誘導(dǎo)。

（2）誘導(dǎo)植株的倍性鑒定：葉形指數(shù)，節(jié)間作為指標(biāo)進(jìn)行形態(tài)學(xué)上的鑒定，利用常規(guī)壓片法鑒定誘導(dǎo)植株的染色體數(shù)目，利用熒光顯微鏡觀測保衛(wèi)細(xì)胞葉綠體數(shù)目，氣軋大小及密度，利用流式細(xì)胞儀檢測誘導(dǎo)植株細(xì)胞的DNA含量，區(qū)分為純四倍體枝條或純四倍體棗樹苗。

（3）純四倍體棗樹苗經(jīng)過繼代、生根培養(yǎng)后，移栽入大田純四倍體種植園；將步驟（2）中得到的純四倍體枝條采接穗嫁接到性狀穩(wěn)定純合四倍體優(yōu)株或優(yōu)枝上。

（4）進(jìn)行四倍體植株的盆栽抗性試驗、大田抗性試驗，選擇抗性水平高、性狀優(yōu)良的株系，果實品質(zhì)的測定，從而選育出優(yōu)良的四倍體冬棗苗木。

其中以上步驟（3）中繼代、生根培養(yǎng)步驟為：將鑒定后的純四倍體棗樹苗培養(yǎng)新抽出的芽梢剪成1-2cm的莖段，莖段保留一節(jié)以上，轉(zhuǎn)接到MS＋BA1.5＋I(xiàn)BA0.5繼代培養(yǎng)基上，將后續(xù)培養(yǎng)形成的芽梢反復(fù)轉(zhuǎn)接不斷的分化增殖；將繼代培養(yǎng)基上的芽梢剪成1cm帶1-2節(jié)的莖段，接到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，試管苗莖段根長達(dá)到2cm以上后，脫瓶移栽入大田苗圃。

其中以上步驟（2）中得到的純四倍體枝條采接穗嫁接到性狀穩(wěn)定純合四倍體優(yōu)株或優(yōu)枝上，進(jìn)行多倍體植株的盆栽抗性試驗、大田抗性試驗，選擇抗性水平高、性狀優(yōu)良的株系。。

其中以上步驟（4）中果實品質(zhì)的測定方法為：對抗性水平高、性狀優(yōu)良的株系進(jìn)行果實品質(zhì)的測定，果實硬度利用GY-1型圓盤硬度計測定，果實的可溶固形物含量利用ATAGO數(shù)字折射計PRl測定，果實維生素C含量采用差分分析分光光度計法測定，果實的大小和重量測定，果核的有無，從而選育出優(yōu)良的四倍體冬棗苗木。

本申請所述的‘沾冬2號’冬棗樹為二、四倍體嵌合體。

本發(fā)明的有益效果為：本申請通過自然芽變倍性嵌合體的純化得到四倍體冬棗植株，無需像離體組培那樣經(jīng)歷過渡培養(yǎng)、溫室栽培、移栽下地等過程，可直接移栽入大田，具有可以進(jìn)行再生材料田間快速評價的優(yōu)勢，提高了‘沾冬2號’的純化效率，加速獲得純四倍體冬棗。