[發(fā)明專利]一種通過枝干截面愈傷不定芽再生純化嵌合體獲得純四倍體冬棗植株的方法

在審

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• 申請日: 2017-06-01
• 公開（公告）號: CN107047315A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尹魁林;王志愛
• 申請（專利權(quán)）人: 濱州市沾化區(qū)冬棗實(shí)業(yè)總公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H1/04;A01G17/00;A01G1/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種通過枝干截面愈傷不定芽再生純化嵌合體獲得純四倍體冬棗植株的方法，其特征在于步驟如下：

（1）從5月中旬到8月中旬選擇健壯‘沾冬2號’冬棗枝干，進(jìn)行截枝處理，在截面上放一圈脫脂棉覆蓋形成層，用含有細(xì)胞分裂素的藥劑潤濕脫脂棉，用塑料袋包住截口并系緊，12-14h后，去除覆蓋物，并用濕泥覆蓋截口，再覆蓋塑料布系緊保濕，進(jìn)行愈傷組織和叢生芽誘導(dǎo)；

（2）誘導(dǎo)植株的倍性鑒定：葉形指數(shù)，節(jié)間作為指標(biāo)進(jìn)行形態(tài)學(xué)上的鑒定，利用常規(guī)壓片法鑒定誘導(dǎo)植株的染色體數(shù)目，利用熒光顯微鏡觀測保衛(wèi)細(xì)胞葉綠體數(shù)目，氣軋大小及密度，利用流式細(xì)胞儀檢測誘導(dǎo)植株細(xì)胞的DNA含量，區(qū)分為純四倍體枝條或純四倍體棗樹苗；

（3）純四倍體棗樹苗經(jīng)過繼代、生根培養(yǎng)后，移栽入大田純四倍體種植園；將步驟（2）中得到的純四倍體枝條采接穗嫁接到性狀穩(wěn)定純合四倍體優(yōu)株或優(yōu)枝上；

（4）進(jìn)行四倍體植株的盆栽抗性試驗(yàn)、大田抗性試驗(yàn)，選擇抗性水平高、性狀優(yōu)良的株系，果實(shí)品質(zhì)的測定，從而選育出優(yōu)良的四倍體冬棗苗木。

2.如權(quán)利要求1所述的一種通過枝干截面愈傷不定芽再生純化嵌合體獲得純四倍體冬棗植株的方法，其特征在于步驟（3）中繼代、生根培養(yǎng)步驟為：將鑒定后的純四倍體棗樹苗培養(yǎng)新抽出的芽梢剪成1-2cm的莖段，莖段保留一節(jié)以上，轉(zhuǎn)接到MS＋BA1.5＋I(xiàn)BA0.5繼代培養(yǎng)基上，將后續(xù)培養(yǎng)形成的芽梢反復(fù)轉(zhuǎn)接不斷的分化增殖；將繼代培養(yǎng)基上的芽梢剪成1cm帶1-2節(jié)的莖段，接到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，試管苗莖段根長達(dá)到2cm以上后，脫瓶移栽入大田苗圃。

3.如權(quán)利要求1所述的一種通過枝干截面愈傷不定芽再生純化嵌合體獲得純四倍體冬棗植株的方法，其特征在于：步驟（2）中得到的純四倍體枝條采接穗嫁接到性狀穩(wěn)定純合四倍體優(yōu)株或優(yōu)枝上，進(jìn)行多倍體植株的盆栽抗性試驗(yàn)、大田抗性試驗(yàn)，選擇抗性水平高、性狀優(yōu)良的株系。

4.如權(quán)利要求1所述的一種通過枝干截面愈傷不定芽再生純化嵌合體獲得純四倍體冬棗植株的方法，其特征在于果實(shí)品質(zhì)的測定方法為：對抗性水平高、性狀優(yōu)良的株系進(jìn)行果實(shí)品質(zhì)的測定，果實(shí)硬度利用GY-1型圓盤硬度計(jì)測定，果實(shí)的可溶固形物含量利用ATAGO數(shù)字折射計(jì)PRl測定，果實(shí)維生素C含量采用差分分析分光光度計(jì)法測定，果實(shí)的大小和重量測定，果核的有無，從而選育出優(yōu)良的四倍體冬棗苗木。

5.如權(quán)利要求1所述的一種通過枝干截面愈傷不定芽再生純化嵌合體獲得純四倍體冬棗植株的方法，其特征在于：所述的‘沾冬2號’冬棗樹為二、四倍體嵌合體。