[發(fā)明專利]分離純化Salsolinol合成酶的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201710405322.8 | 申請(qǐng)日： | 2017-06-01 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN107460183B | 公開（公告）日： | 2020-05-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 陳薛釵;鄧玉林 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 北京工業(yè)大學(xué);北京理工大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N9/88 | 分類號(hào)： | C12N9/88 |
| 代理公司： | 北京思海天達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11203 | 代理人： | 張立改 |
| 地址： | 100124 *** | 國(guó)省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 分離 純化 salsolinol 合成 方法 | ||
1.分離純化Salsolinol合成酶的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)采用高氯酸沉淀法對(duì)Salsolinol合成酶的粗酶液進(jìn)行預(yù)處理；
(2)將步驟(1)經(jīng)過高氯酸處理的Salsolinol合成酶的粗酶液中加入K2CO3，于-80℃放置15分鐘后取出，離心，取上清液；
(3)對(duì)步驟(2)所得上清液進(jìn)行超濾，至少包括采用截留分子量3kD的超濾管；
(4)對(duì)步驟(3)超濾后的濾液采用親水色譜(HILIC)的方法進(jìn)一步分離純化Sal合成酶。
2.按照權(quán)利要求1所述的分離純化Salsolinol合成酶的方法，其特征在于，采用硅膠、氰基或氨基色譜柱，采用乙腈水溶液作為流動(dòng)相，乙腈的體積百分含量為50-95％，按照乙腈比例從高到低依次洗脫。
3.按照權(quán)利要求1所述的分離純化Salsolinol合成酶的方法，其特征在于，進(jìn)行兩次親水色譜(HILIC)分離純化。
4.按照權(quán)利要求1所述的分離純化Salsolinol合成酶的方法，其特征在于，還包括在采用親水色譜(HILIC)的方法進(jìn)一步分離純化Sal合成酶之后再通過電泳方法進(jìn)一步分離純化分子量相對(duì)更小的Sal合成酶。
5.按照權(quán)利要求1所述的分離純化Salsolinol合成酶的方法，其特征在于，步驟(1)采用高氯酸溶液，高氯酸溶液中還含有偏亞硫酸鈉和EDTA。
6.按照權(quán)利要求5所述的分離純化Salsolinol合成酶的方法，其特征在于，高氯酸溶液含1M高氯酸、10mM偏亞硫酸鈉和10mM EDTA。
7.按照權(quán)利要求6所述的分離純化Salsolinol合成酶的方法，其特征在于，高氯酸溶液與Salsolinol合成酶的粗酶液的體積比為1:5。
8.按照權(quán)利要求1所述的分離純化Salsolinol合成酶的方法，其特征在于，步驟(2)中K2CO3的摩爾數(shù)是步驟(1)中高氯酸的0.5倍。
9.按照權(quán)利要求1所述的分離純化Salsolinol合成酶的方法，其特征在于，還包括在采用截留分子量3kD的超濾管之前，采用截留分子量大于3kD的超濾管進(jìn)行超濾。
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