[發明專利]含有FGFR，磷脂雙分子層和膜骨架蛋白MSP的類膜體系及其制備方法

在審

• 申請號: 201710402086.4
• 申請日: 2017-05-31
• 公開（公告）號: CN107090030A
• 公開（公告）日: 2017-08-25
• 發明（設計）人: 王俊峰;趙宏鑫;劉娟娟
• 申請（專利權）人: 中國科學院合肥物質科學研究院
• 主分類號: C07K14/71
• 分類號: C07K14/71;C07K16/00
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司11021
• 代理人: 穆彬

1.一種人造的含有FGFR，磷脂雙分子層和膜骨架蛋白MSP的類膜體系，所述類膜體系包含：

1)成纖維細胞生長因子受體(FGFR)，

2)磷脂雙分子層，

3)膜骨架蛋白(MSP)，

其中，所述MSP包裹磷脂形成磷脂雙分子層，所述FGFR的胞外區在磷脂雙分子層的一側，所述FGFR的胞內區在磷脂雙分子層的另一側，所述FGFR的跨膜區由磷酸雙分子層包裹，并貫穿整個磷脂雙分子層。

2.根據權利要求1所述的人造的含有FGFR，磷脂雙分子層和膜骨架蛋白MSP的類膜體系，其制備過程包括以下步驟：

1)將FGFR目的基因插入到表達載體中，并在細胞中表達FGFR蛋白；

2)將純化的所述FGFR蛋白與MSP、磷脂和去污劑混合；

3)去除來自步驟2)中的多余的去污劑；和

4)分離含有磷脂雙分子層的FGFR的類膜體系。

3.一種制備人造的含有FGFR，磷脂雙分子層和和膜骨架蛋白MSP的類膜體系的方法，所述方法包括以下步驟：

1)將FGFR目的基因插入到表達載體中，并在細胞中表達FGFR蛋白；

2)將純化的所述FGFR蛋白與MSP蛋白、磷脂和去污劑混合；

3)去除來自步驟2)中多余的去污劑；和

4)分離含有磷脂雙分子層的FGFR的類膜體系。

4.根據權利要求1或2所述的人造的含有FGFR，磷脂雙分子層和膜骨架蛋白MSP的類膜體系或權利要求3所述的方法，所述磷脂選自POPG、POPC、POPE、POPS、DOPG、DOPC、DOPE、DOPS、DMPC、PI(3，4)P2、PI(4，5)P2、PI(3，4，5)P3或其任意組合，優選為POPG。

5.根據權利要求1所述的人造的含有FGFR，磷脂雙分子層和膜骨架蛋白MSP的類膜體系，所述FGFR包括FGFR1c、FGFR1b、FGFR2c、FGFR2b、FGFR3c、FGFR3b、FGFR4或它們的突變體，所述突變體保持FGFR的特有生物活性和功能。

6.根據權利要求2所述的人造的含有FGFR，磷脂雙分子層和膜骨架蛋白MSP的類膜體系或權利要求3所述的方法，所述表達載體是真核表達載體，優選選自pFastBac^TM1，pFastBac^TM-Gus，pFastBac^TMHT，pFastBac^TMHT-CAT，pFastBac^TMDual或pFastBac^TMDual-Gus/CAT，所述細胞是真核細胞，優選為昆蟲細胞，更優選Sf9或Sf21細胞。

7.根據權利要求2所述的人造的含有FGFR，磷脂雙分子層和膜骨架蛋白MSP的類膜體系或權利要求3所述的方法，所述FGFR蛋白與MSP蛋白，磷脂和去污劑的比例為1∶1-2∶50-100∶100-200，優選為1∶1∶50∶100。

8.根據權利要求2所述的人造的含有FGFR，磷脂雙分子層和膜骨架蛋白MSP的類膜體系或權利要求3所述的方法，步驟4)中所述分離利用分子篩進行。

9.根據權利要求2所述的人造的含有FGFR，磷脂雙分子層和膜骨架蛋白MSP的類膜體系或權利要求3所述的方法，所述去污劑選自壬基酚聚氧乙烯醚(NP-40)、聚乙二醇辛基苯基醚或膽酸鈉，優選是膽酸鈉。

10.權利要求1或2所述的人造的含有FGFR，磷脂雙分子層和膜骨架蛋白MSP的類膜體系用于制備抗體、藥物篩選或開發FGFR活性檢測試劑盒的用途，所述藥物優選為FGFR抑制劑。