[發明專利]一種乳糖中有關物質的電噴霧檢測器液相色譜分析方法

在審

• 申請號: 201710400744.6
• 申請日: 2017-05-31
• 公開（公告）號: CN107315053A
• 公開（公告）日: 2017-11-03
• 發明（設計）人: 李宏麗;王保成;孫亞飛;袁耀佐;高正松;張玫
• 申請（專利權）人: 南京威爾藥業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 南京眾聯專利代理有限公司32206
• 代理人: 顧進

技術領域

本發明涉及一種乳糖中有關物質的定量檢測，尤其涉及一種乳糖中有關物質的電噴霧檢測器液相色譜分析方法。

背景技術

乳糖（lactose）是天然存在于動物乳液中的還原性二糖，人乳中含5%～8%，牛乳中含4%～5%，由一分子葡萄糖和一分子半乳糖所構成(圖1)，有ɑ和β兩型。

ɑ型 β型

在醫藥工業中，可用于藥品的甜味劑和賦形劑，根據藥品劑型需要可制成結晶乳糖、直壓乳糖和預混乳糖輔料。乳糖含量及有關物質反映了產品質量和營養價值。因此，建立一個簡便快速、靈敏準確的分析方法，對于區別乳糖優劣和控制產品工藝等都有重要的指導作用。

目前，國內外有關糖類檢測方法的報道很多，大致分為兩大類：一類是酶化學方法，該法準確度和專屬性較差，同時酶的來源與純化也存在較大問題。另一類是色譜法，主要包括氣相色譜法(GC)、液質聯用法、離子色譜-脈沖安培檢測法、液相色譜示差檢測法和液相色譜蒸發光散射檢測法等。其中，氣相色譜和液質聯用法需要衍生處理，操作繁瑣；離子色譜-脈沖安培檢測器法，儀器使用成本較高,穩定性較差，色譜條件嚴格；蒸發光散射檢測器液相色譜分析方法，發現也存在靈敏度低，重現性差，線性范圍較窄，易產生基線漂移等問題。2015年版《中國藥典》中乳糖含量和有關物質測定采用的是示差折光檢測法，其靈敏度低、受環境影響波動較大、易出現基線不穩、色譜峰形較差、色譜柱使用壽命短等問題。

乳糖分子極性較大，結構中沒有強生色官能團，紫外吸收較弱，無法采用常用的反相液相色譜-紫外檢測器進行準確的定性與定量測定。查閱國外最新藥典標準收載乳糖的的情況，發現僅歐洲和英國藥典采用氣相色譜法對其含量進行控制，且均未控制有關物質。電噴霧檢測器是近年來發展起來的一種新型檢測器，該檢測器屬于通用質量型檢測器，與紫外檢測器、示差折光檢測器和蒸發光散射檢測器相比，靈敏度高，重現性好，可直接分離測定單糖和二糖等低聚糖。目前尚未見采用高效液相色譜-電噴霧檢測器（HPLC-CAD）法同時測定乳糖含量及有關物質的文獻報道。

發明內容

本發明提供了一種乳糖中有關物質的電噴霧檢測器液相色譜分析方法，建立了測定乳糖有關物質的HPLC-CAD法，為乳糖的質量控制提供新的技術手段。

一種乳糖中有關物質的電噴霧檢測器液相色譜分析方法，具體分析方法如下：

（1）色譜條件設置：聚合物氨基柱，乙腈-水為流動相，流速0.5-1.5 mL/min，柱溫20-50℃；電噴霧檢測器，檢測器霧化溫度：30-45 ℃，冪率：1-1.2，采樣頻率：10-15 Hz，過濾常數：3-4 s；

（2）系統適用性溶液制備：精密稱取半乳糖、葡萄糖、乳果糖、蔗糖以及乳糖對照品各適量，置100mL量瓶中，混合均勻，加溶劑溶解并稀釋至刻度，作為系統適用性溶液；

（3）供試品溶液制備：取乳糖樣品約100.0mg，精密稱定，置50 mL 量瓶中，加水適量，超聲、溶解后，用乙腈定容至刻度，搖勻，作為有關物質測定供試品溶液；所述供試品溶液的濃度為2.0 mg/mL；

（4）對照品溶液制備：精密量取供試品溶液1.0 mL，置100mL量瓶，加溶劑稀釋定容至刻度，作為對照溶液；所述對照溶液的濃度為20.0 μg/mL；

（5）檢測：精密量取經過步驟（2）制備的系統適應性溶液20μl，注入液相色譜儀，各雜質峰之間的分離度符合要求；再精密量取經過步驟（4）制備的對照溶液和經過步驟（3）制備的供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖；

（6）根據供試品溶液的色譜圖中的峰值，按自身對照法計算。

優選的，所述聚合物氨基柱為Shodex Asahipak NH2P-50 4E，4.6×250 mm，5 μm。

優選的，所述步驟（1）中乙腈-水流動相的配比是乙腈：水=75:25。

優選的，所述步驟（2）中所述步驟（2）中乳糖的濃度為2.0mg/mL。

優選的，所述分析方法中雜質檢測限（S/N=3）為小于10 ng，定量限（S/N=10）小于25 ng。

優選的，所述步驟（2）中溶劑為乙腈。

本方法還可用于乳糖含量的檢測上，以及其他糖類含量和有關物質的檢測上，如蔗糖、葡萄糖、甘露醇等。