[發明專利]一種適于棗染色體倍性測定的細胞核懸浮液快速制備方法在審
| 申請號： | 201710400298.9 | 申請日： | 2017-05-31 |
| 公開（公告）號： | CN108982192A | 公開（公告）日： | 2018-12-11 |
| 發明（設計）人： | 劉孟軍;劉平;王利虎 | 申請（專利權）人： | 河北農業大學 |
| 主分類號： | G01N1/30 | 分類號： | G01N1/30;G01N15/14 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 071000 *** | 國省代碼： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 細胞核 染色體倍性 懸浮液 預冷 快速制備 裂解液 培養皿 流式細胞儀 染色體樣本 倍性鑒定 低溫避光 計算目標 快速檢測 紗布過濾 幼嫩葉片 棗屬植物 超純水 離心管 刀片 酸棗 熒光 放入 混勻 可用 切碎 制備 清洗 采集 環節 改進 | ||
【權利要求書】：
1.一種適于棗染色體倍性測定的細胞核懸浮液快速制備方法，其特征在于具體包括以下幾個步驟：
（1）樣品的采集及保存：采集幼嫩的葉片，置于-20~4℃條件下保存；
（2）Tris-MgCl2裂解液的配制：取2.422g Tris-HCl、0.0813g MgCl2·6H2O于100mL容量瓶中，加入0.5mL的Triton-100，用超純水定容，利用NaOH調節pH值至7.0-7.5，即得Tris-MgCl2裂解液；
（3）PI染液的配置：取1mg PI染料融于1mL的超純水或PBS緩沖溶液中，得PI染液；
（4）細胞核懸浮液的制備：選取幼嫩葉片2~4片，用超純水清洗1~3次，放入4℃預冷的培養皿中，加入1mL 4℃預冷的Tris-MgCl2裂解液，用刀迅速切碎葉片，再加入1mL 4℃預冷的Tris-MgCl2裂解液，混勻后靜置1~10 min，用500目紗布過濾進入離心管中，加入約1μL 濃度為10mg/mL的RNA酶及10~30μL 1mg/mL的PI染液，置于4℃條件下避光4~30 min，得細胞核懸浮液；
（5）倍性鑒定：細胞核懸浮液用流式細胞儀測定倍性，通過計算目標峰的熒光強度獲得倍性關系。
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