[發明專利]基于熒光共振能量轉移的AFP檢測法

在審

• 申請號: 201710399835.2
• 申請日: 2017-05-31
• 公開（公告）號: CN107238709A
• 公開（公告）日: 2017-10-10
• 發明（設計）人: 周勇;吳秀蘭
• 申請（專利權）人: 重慶高圣生物醫藥有限責任公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/533;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于熒光共振能量轉移的AFP檢測法，其特征在于，利用熒光配對染料之間熒光共振能量轉移快速均相檢測廣譜腫瘤標記物AFP，包括以下步驟：探針1和探針2的制備；探針1-AFP-探針2熒光共振能量轉移體系制備；AFP的工作曲線繪制；待測樣本測試。

2.權利要求1所述的基于熒光共振能量轉移的AFP檢測法，其特征在于，熒光配對染料為CdS QDs-羅丹明B配對染料、CdS QDs-紅色熒光微球配對染料。

3.權利要求2所述的基于熒光共振能量轉移的AFP檢測法，其特征在于，CdS QDs的最大發射光譜與羅丹明B、紅色熒光微球的最大吸收光譜有較好的重疊。

4.權利要求1所述的基于熒光共振能量轉移的AFP檢測法，其特征在于，探針1為CdS QDs標記的AFP抗體，探針2為羅丹明B或紅色熒光微球標記的AFP抗體。

5.權利要求4所述的基于熒光共振能量轉移的AFP檢測法，其特征在于，探針1和探針2所標記的AFP抗體為配對抗體。

6.權利要求1所述的基于熒光共振能量轉移的AFP檢測法，其特征在于，探針1-AFP-探針2熒光共振能量轉移體系為：

樣本（標準品或待測樣本） 2 μL

0.05mg/mL探針1 20 μL

0.05mg/mL探針2 10 μL

PBS緩沖液50 μL

ddH₂O補足至100 μL。

7.權利要求6所述的基于熒光共振能量轉移的AFP檢測法，其特征在于，熒光共振能量體系檢測AFP的工作曲線步驟為：先將不同濃度標準品樣本分別與探針1、PBS緩沖液接觸混勻后，分別加入探針2，超純水定容到100 μL；然后常溫旋轉30～60 min后，將該體系置于多功能酶標儀上檢測熒光強度；記錄混合液在探針2最大發射波長（580 nm或600 nm處）的熒光強度，存在AFP時F，不存在AFP時F₀，以（F-F₀）對AFP濃度繪制標準曲線。

8.權利要求7所述的基于熒光共振能量轉移的AFP檢測法，其特征在于，待測樣品檢測方法是通過探針1-AFP-探針2熒光共振能量轉移體系檢測待測樣本的熒光信號，將待測樣品的熒光信號變化值代入AFP標準曲線，得出待測樣品中AFP的含量。