[發明專利]用于制備乙肝疫苗的組合物及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201710399824.4
• 申請日: 2017-05-31
• 公開（公告）號: CN107281484A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發明（設計）人: 靳廣毅;王竹林;唐黎;胡云龍
• 申請（專利權）人: 深圳大學
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/29;A61K39/385;A61P1/16;A61P31/20;A61P37/02;C07D473/18;A61K31/52
• 代理公司: 深圳市順天達專利商標代理有限公司44217
• 代理人: 陸軍

1.一種用于制備乙肝疫苗的組合物，其特征在于，包含免疫激動劑活化酯、HBsAg以及鋁佐劑，其中組成比例為：免疫激動劑活化酯∶HBsAg∶Al＝n∶m∶q，HBsAg代表重組乙肝表面抗原，Al代表鋁佐劑中的鋁；n、m、q分別代表免疫激動劑活化酯、HBsAg、Al的摩爾數或重量比，且代表性的摩爾數比為n∶m∶q＝4∶1∶18181；其中免疫激動劑活化酯(T7)的結構式如下：

其中，R為OH或SH。

2.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，HBsAg的氨基酸序列包括200-400個氨基酸，HBsAg的分子量為20000Da-44000Da。

3.根據權利要求2所述的組合物，其特征在于，HBsAg的氨基酸序列包括200-250個氨基酸；HBsAg的分子量為20000Da-25000Da。

4.根據權利要求3所述的組合物，其特征在于，HBsAg的氨基酸序列如下：

Met Glu Asn Ile Thr Ser Gly Phe Leu Gly Pro Leu Leu Val Leu Gln Ala Gly Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile Leu Thr Ile Pro Gln Ser Leu Asp Ser Trp Trp Thr Ser Leu Asn Phe Leu Gly Gly Ser Pro Val Cys Leu Gly Gln Asn Ser Gln Ser Pro Thr Ser Asn His Ser Pro Thr Ser Cys Pro Pro Ile Cys Pro Gly Tyr Arg Trp Met Gys Leu Arg Arg Phe Ile Ile Phe Leu Phe Ile Leu Leu Leu Cys Leu Ile Phe Leu Leu Val Leu Leu Asp Tyr Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu Ile Pro Gly Ser Thr Thr Thr Ser Thr Gly Pro Cys Lys Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly Asn Ser Met Phe Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Thr Asp Gly Asn Cys Thr Cys Ile Pro Ile Pro Ser Ser Trp Ala Phe Ala Lys Tyr Leu Trp Glu Trp Ala Ser Val Arg Phe Ser Trp Leu Ser Leu Leu Val Pro Phe Val Gln Trp Phe Val Gly Leu Ser Pro Thr Val Trp Leu Ser Ala Ile Trp Met Met Trp Tyr Trp Gly Pro Ser Leu Tyr Ser Ile Val Ser Pro Phe Ile Pro Leu Leu Pro Ile Phe Phe Cys Leu Trp Val Tyr Ile。

5.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述鋁佐劑為氫氧化鋁凝膠、磷酸鋁、硫酸鋁、銨明礬或鉀明礬。

6.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述免疫激動劑活化酯的制備方法包括：將反應起始物溶于無水DMF中，分批加入EDC和NHS，室溫反應，將反應液倒入冰水中，抽濾，水洗，干燥，得白色固體狀的免疫激動劑活化酯；所述反應起始物與無水DMF的質量體積比為0.075g/ml-0.1g/ml；所述EDC的加入量與所述反應起始物的質量比為0.45-0.6；所述NHS的加入量與所述反應起始物的質量比為0.25-0.4；

其中，反應起始物的結構式為：

7.根據權利要求6所述的組合物，其特征在于，室溫反應的時間為1.5h-4h。

8.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述免疫激動劑活化酯在制備治療性乙肝疫苗中的應用、以及在制備人和動物免疫調節藥物中的應用。

9.權利要求1-8中任一所述的組合物的制備方法，其特征在于，包括：將免疫激動劑活化酯與以DMSO或生理鹽水為溶劑的HBsAg母液相混合，于4℃-8℃搖動過夜，再與9倍體積的鋁佐劑溶液混合得到用于制備預防和治療乙肝疫苗的組合物。

10.權利要求1-8中任一所述的組合物在用于制備提高針對乙肝表面抗原HBsAg的抗體效價和效應T細胞的藥物中的應用、以及在制備用于預防和治療乙肝的疫苗和藥物中的應用。