[發明專利]一種用于甲狀腺癌體外診斷試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 201710399343.3
• 申請日: 2017-05-31
• 公開（公告）號: CN107085110A
• 公開（公告）日: 2017-08-22
• 發明（設計）人: 余躍飛;王小中;黃龍
• 申請（專利權）人: 江西樂成生物醫療有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/531
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及癌癥診斷檢測用的試劑盒技術領域，具體為一種用于甲狀腺癌體外診斷試劑盒及其檢測方法。

背景技術

中國抗癌協會甲狀腺癌專業委員會主任委員高明教授稱，近年來，我國甲狀腺癌高發，已成為增長速度最快的惡性腫瘤，發病率10年增長了近5倍。甲狀腺癌尤其好發于中青年女性，女性和男性比例為3：1，已成近20年來我國癌癥譜中女性惡性腫瘤上升速度最快的腫瘤。如今在一、二線城市的女性群體中，該病發病率基本位列三甲，有的甚至已躍居榜首。臨床上甲狀腺良性和惡性腫瘤往往僅表現為甲狀腺結節，專家提醒甲狀腺癌患者關鍵在于早發現、早治療，甲狀腺結節的良惡性鑒別診斷尤其重要。中華醫學會內分泌學會的報告顯示，甲狀腺結節的患病率是18.6%，這意味著我國每5人中就有近1人存在甲狀腺結節。也就是說，我國有近2.8億人要進行甲狀腺結節的良惡性鑒別診斷。

臨床治療發現，甲狀腺癌的早期診斷及治療非常重要。

腫瘤標志物(tumor markers，TM)是指在腫瘤發生和增殖過程中，由腫瘤細胞本身合成、釋放，或由機體對腫瘤細胞反應而產生的標志腫瘤存在和生長的一類物質。這些物質在正常成人中不存在或者是在癌癥患者中出現的水平顯著高于正常人。目前腫瘤標志物檢測技術被認為是早期發現無癥狀微灶腫瘤的唯一途徑，這一檢測技術可先于X光片、超聲、CT、MRI或PET-CT等物理檢查發現腫瘤。可用于高危人群惡性腫瘤的篩查，腫瘤診斷與鑒別診斷，評估治療的效果，預測或監視腫瘤復發或轉移。目前，市場上還沒有針對甲狀腺癌的快速高效診斷試劑盒問世，嚴重影響到甲狀腺癌早期發現及治療。

發明內容

本發明的目的在于提供一種靈敏度高、準確性強且使用方便高效的用于甲狀腺癌體外診斷試劑盒及其檢測方法，以解決上述背景技術中提出的甲狀腺癌診斷存在不足的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種用于甲狀腺癌體外診斷試劑盒，包括捕獲抗體，所述捕獲抗體是L選擇素制得的單克隆抗體。

優選的，所述捕獲抗體的制備方法包括的步驟如下：

S1：抗原的制備；把L選擇素的基因克隆到真核表達載體，并在哺乳動物細胞中實現蛋白的表達，純化后得到抗原；

S2：捕獲抗體的制備；將上述抗原免疫哺乳動物，得到相應的單克隆抗體為捕獲抗體。

優選的，所述試劑盒還包括檢測抗體，所述檢測抗體為L選擇素制得的多克隆抗體。

優選的，所述檢測抗體的制備方法包括的步驟如下：

S1：抗原的制備；把L選擇素的基因克隆到真核表達載體，并在哺乳動物細胞中實現蛋白的表達，純化后得到抗原；

S2：檢測抗體的制備；將上述抗原免疫哺乳動物，得到相應的多克隆抗體為檢測抗體。

優選的，所述捕獲抗體預先包被于微量滴定板的孔內；

本發明還提供一種技術方案：一種用于甲狀腺癌體外診斷試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

S1：抗原的制備：將L選擇素基因克隆到真核表達載體，并在哺乳動物細胞中實現蛋白的表達，純化后得到所需的抗原；

S2：捕獲抗體的制備：將上述抗原免疫哺乳動物得到相應的單克隆抗體，所述單克隆抗體作為本試劑盒的捕獲抗體；

S3：檢測抗體的制備：將上述抗原免疫哺乳動物得到相應的多克隆抗體，所述多克隆抗體作為本試劑盒的檢測抗體；

S4：捕獲抗體包被：

S4.1：用碳酸鹽/碳酸氫鹽緩沖液將濃度為1μg/ml的捕獲抗體包被微量滴定板的孔；

S4.2：封蓋微量滴定板并在4℃下孵育過夜；

S4.3：棄去包被液，并用洗滌液洗滌微量滴定板兩次，每次在微孔中加入200μl PBST，除去洗滌液和剩余的液滴，晾干放于4℃環境中；

S5：封閉：每孔添加200μl封閉緩沖液，封閉包被孔中剩余的蛋白質結合位點。

本發明提供另一種技術方案：一種用于甲狀腺癌體外診斷試劑盒的檢測方法，包括以下步驟：

S1：抗原的制備：將L選擇素基因克隆到真核表達載體，并在哺乳動物細胞中實現蛋白的表達；

S2：捕獲抗體的制備：將上述抗原免疫哺乳動物得到相應的單克隆抗體，所述單克隆抗體作為本試劑盒的捕獲抗體；

S3：檢測抗體的制備：將上述抗原免疫哺乳動物得到相應的多克隆抗體，所述多克隆抗體作為本試劑盒的檢測抗體；

S4：捕獲抗體包被：

S4.1：用碳酸鹽/碳酸氫鹽緩沖液將濃度為1μg/ml的捕獲抗體包被微量滴定板的孔；