[發明專利]一種用于早期肝細胞損傷診斷的檢測方法在審

申請號：	201710397913.5	申請日：	2017-05-31
公開（公告）號：	CN107121325A	公開（公告）日：	2017-09-01
發明（設計）人：	周惠良;胡海芹;萬蒙	申請（專利權）人：	江西樂成生物醫療有限公司
主分類號：	G01N1/38	分類號：	G01N1/38;G01N21/31
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種用于早期肝細胞損傷診斷檢測方法
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及醫療診斷技術領域，具體為一種用于早期肝細胞損傷診斷的檢測方法。

背景技術

肝臟是維持生命存在的最重要的器官之一，是人體內最大的內臟器官，其主要功能涉及物質和能量代謝、生物解毒、生物合成、膽汁分泌、內分泌和免疫等。任何原因引起的肝損傷均會不同程度地影響肝臟的這些功能，同時引發其他組織器官的功能障礙。

在當前臨床應用中，有關肝臟生化檢測項目及全自動生化儀器的應用逐漸普遍。其中，肝細胞損傷和損傷程度常根據SALT（血清丙氨酸氨基轉移酶）、SAST（血清天冬氨酸氨基轉移酶)來判定。ALT存在于肝細胞漿中，為其細胞內外濃度比為5000：1，細胞膜破裂或變形時，ALT大量進入血液中。研究發現1%的肝細胞壞死時，血清ALT水平即可升高1倍。AST主要分布于心肌，其次是肝臟、骨骼肌和腎臟等組織中。由于大約80%的AST存在于線粒體內，所以對肝細胞損傷的敏感度不如ALT，升高的幅度也不如ALT大。但是，當AST持續升高，數值超過ALT，往往提示肝實質損害嚴重，是慢性化程度加重的標志。因此，ALT和AST主要對中晚期肝細胞膜損傷最為敏感，對肝細胞膜早期損傷覆蓋不全，需要新的診斷標準物輔助診斷。

一項藥理研究發現，注射CCl₄的小鼠，SGR（血清谷胱甘肽還原酶）在6 h達到峰值，SAST和SALT在24 h達到峰值；36h后SGR基本降至正常水平，SAST、SALT遠遠超過正常水平。表明在急性肝損傷模型中SGR比SAST、SALT更早增加更快減少，敏感性更高。另一項臨床研究也發現，急性肝炎早期階段，所有患者SGR異常升高。

谷胱甘肽還原酶（GR）主要存在于線粒體和細胞液中。人體內GR活性強弱依次為肝、腎、胰、心、甲狀腺、紅細胞和血漿。可以及時清除人體代謝過程中產生的氧自由基（OFR），是維持細胞中還原型谷胱甘肽（GSH）含量的主要黃素酶；對保護巰基蛋白和酶的天然活性，肝細胞膜的完整性具有重要價值。并且，GR活性上升很小。在肝炎情況下，GR也很少能達到正常值（0.18-0.61/μmol serum/h）上限的3倍；而對于正常人而言，GR的活性浮動也很小，小到輕微的偏差也能幫助做出診斷。因此，在多種肝病類型中，GR顯著升高，具有臨床診斷意義。

此外，GR除了應用肝臟疾病以外，在其他疾病中也具有臨床診斷價值。例如，急性傳染性病人SGR活性常在第一周開始升高，可高于對照值1倍以上，并隨黃疸加深而增高，待黃疸達峰值后一周內恢復正常；惡性腫瘤患者SGR升高的陽性率為35%～80%，以白血病及骨發生繼發性腫瘤者活性最高，而良性腫瘤患者SGR活性不增；未經治療的急性白血病及慢性粒細胞性白血病患者的SGR活性，多超過對照值3倍以上；在先天性缺乏G-6-PD（葡萄糖-6-磷酸脫氫酶）患者中，其紅細胞GR活性高于對照值2倍以上。

發明內容

本發明的目的在于提供一種靈敏度高、穩定性好的用于早期肝細胞損傷診斷的檢測方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種用于早期肝細胞損傷診斷的檢測方法，包括以下步驟：

S1：樣品準備，包括有新鮮不溶血的血清、含抗凝劑的血漿和紅細胞裂解液三種；

S2：試劑盒準備，包括有空白管、校準品管、樣本管、蒸餾水、校準品、樣本、R1試劑和R2試劑；

S3：樣品測定，包括如下步驟：

S3.1：依次取空白管加入8μl的蒸餾水、取校準品管加入8μl的校準品、取樣本管加入8μl的樣本；

S3.2：分別向S3.1中的空白管、校準品管、樣本管中添加R1試劑混合均勻，置37℃孵育300s；

S3.3：再向添加R1試劑后的空白管、校準品管、樣本管中添加R2試劑混合均勻；

S3.4：將添加R2試劑后的空白管、校準品管、樣本管置37℃孵育60s后，在340nm波長處，每隔20 s讀取吸光度，連續讀數120s，計算平均變化率△A/min；

S4：計算樣品中GR活力值，包括血清、血漿樣本值和紅血球樣本值。

優選的，針對S1中紅細胞裂解液樣品準備包括以下步驟：