[發明專利]一種用于早期肝細胞損傷診斷的檢測方法

在審

• 申請號: 201710397913.5
• 申請日: 2017-05-31
• 公開（公告）號: CN107121325A
• 公開（公告）日: 2017-09-01
• 發明（設計）人: 周惠良;胡海芹;萬蒙
• 申請（專利權）人: 江西樂成生物醫療有限公司
• 主分類號: G01N1/38
• 分類號: G01N1/38;G01N21/31
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于早期肝細胞損傷診斷的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1：樣品準備，包括有新鮮不溶血的血清、含抗凝劑的血漿和紅細胞裂解液三種；

S2：試劑盒準備，包括有空白管、校準品管、樣本管、蒸餾水、校準品、樣本、R1試劑和R2試劑；

S3：樣品測定，包括如下步驟：

S3.1：依次取空白管加入8μl的蒸餾水、取校準品管加入8μl的校準品、取樣本管加入8μl的樣本；

S3.2：分別向S3.1中的空白管、校準品管、樣本管中添加R1試劑混合均勻，置37℃孵育300s；

S3.3：再向添加R1試劑后的空白管、校準品管、樣本管中添加R2試劑混合均勻；

S3.4：將添加R2試劑后的空白管、校準品管、樣本管置37℃孵育60s后，在340nm波長處，每隔20 s讀取吸光度，連續讀數120s，計算平均變化率△A/min；

S4：計算樣品中GR活力值，包括血清、血漿樣本值和紅血球樣本值。

2.根據權利要求1所述的一種用于早期肝細胞損傷診斷的檢測方法，其特征在于，針對S1中紅細胞裂解液樣品準備包括以下步驟：

S1.1：用抗凝管收集血液，顛倒混勻；

S1.2：取0.5ml全血，2000rpm離心5min，棄上清，去除血漿；

S1.3：用0.9%氯化鈉懸浮清洗沉淀，2000rpm離心5 min，棄上清，去除0.9%氯化鈉，重復懸浮清洗3次；

S1.4：用冰冷的重蒸餾水，重懸細胞沉淀，恢復到0.5 ml，于2℃-8℃靜置10min，2000rpm離心5min，取上清，溶解產物液；

S1.5：取溶解產物液100μl，加0.9%氯化鈉溶液1.9ml，稀釋20倍，備檢測。

3.根據權利要求1所述的一種用于早期肝細胞損傷診斷的檢測方法，其特征在于，針對S2中R1試劑成分配比為磷酸鹽緩沖液200mmol/L和GSSG 4mmol/L；R2試劑成分配比為磷酸鹽緩沖液200mmol/L、NADPH 0.2mmol/L和EDTA 1mmol/L。

4.根據權利要求1所述的一種用于早期肝細胞損傷診斷的檢測方法，其特征在于，針對S4中血清、血漿樣本值的計算公式為：GR活性（U/L）=樣本△A/min÷校準品△A/min×校準品GR活性（U/L）；紅血球樣本值的計算公式為：GR活性（U/gHb）= 樣本△A/min÷校準品△A/min×校準品GR活性（U/L）×20÷血紅蛋白（Hb）水平（g/L）。