[發明專利]腫瘤免疫T細胞檢測試劑盒和檢測方法

在審

• 申請號: 201710396412.5
• 申請日: 2017-05-31
• 公開（公告）號: CN107099603A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: 唐珂;胡邊
• 申請（專利權）人: 成都克里斯博生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京迎碩知識產權代理事務所(普通合伙)11512
• 代理人: 張群峰,錢揚保

1.一種腫瘤免疫T細胞檢測試劑盒，包括基于SYBR-Green定量PCR擴增對人體外周血液T細胞中免疫相關靶基因進行PCR擴增以檢測其特異定量表達的特異引物，所述免疫相關靶基因包括受體和配體相關靶基因、NK細胞相關靶基因以及關鍵細胞因子基因，

所述受體和配體相關靶基因包括：2B4、B7-1、B7-2、BTLA、C4A、CD4、CD8a、CD11b、CD11c、CD27、CD28、CD3D、CD3E、CD3G、CD40、CD40L、CD48、CD70、CD74、CD80、CD86、CD96、CD137、CD155、CD160、CD226、CD247、CEACAM1、CTLA4、FoxP3、Galectin3、Galectin9、GITR、GITRL、GP100、HHLA2、HVEM、KLRG-1、LAG3、LIGHT、MAGEA3、HLA-A、HLA-B、HLA-DRA、HLA-DRB1、MLANA、OX40、OX40L、PD1、PDL1、PDL2、TRA、TRB、TCF7、TIGIT、TIM1、TIM3、TRAV40、VISTA，與每個所述受體和配體相關靶基因所對應的特異引物的DNA序列如表1所示；

所述NK細胞相關靶基因包括：CD16、CD94、FAS、FASL、HLA-E、IL-2、IL-12、IL-15、KIR、MIC-A、NKG2A、NKG2D、TRAIL、TRAILR、ULBP1，與每個所述NK細胞相關靶基因所對應的特異引物的DNA序列如表2所示；

所述關鍵細胞因子基因包括：Granzyme B、IFN-gamma、IL-4、IL-5、IL6、IL10、IL13、Perforin、TGF-beta、TNF-alpha，與每個所述關鍵細胞因子基因所對應的特異引物的DNA序列如表3所示。

2.根據權利要求1所述的檢測試劑盒，還包括：

多孔PCR反應板，每對特異引物對應容納于PCR反應板的一個孔，并且PCR反應板還包括至少一個空白陰性對照孔和至少一個看家基因孔，

其中空白陰性對照孔中不含任何特異引物，所述至少一個看家基因孔中含有與該看家基因所對應的特異引物。

3.根據權利要求2所述的檢測試劑盒，PCR反應板的每個孔中均含有除人體外周血液T細胞cDNA外包括特異引物在內的PCR反應所需試劑。

4.根據權利要求2所述的檢測試劑盒，所述看家基因包括：Beta-actin、PPIA、TBP、18S，與每個所述看家基因所對應的特異引物的DNA序列如表4所示。