[發(fā)明專利]一種基于OCTS技術(shù)的惡性膠質(zhì)瘤CAR-T治療載體及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710390650.5
• 申請(qǐng)日: 2017-05-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107267555B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-03-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 祁偉;俞磊;康立清;林高武;余宙
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海優(yōu)卡迪生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/867
• 分類號(hào): C12N15/867;C12N15/62;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 上海市匯業(yè)律師事務(wù)所 31325
• 代理人: 王函

本發(fā)明公開(kāi)了一種基于OCTS技術(shù)的惡性膠質(zhì)瘤CAR?T治療載體，包括慢病毒骨架質(zhì)粒、人EF1α啟動(dòng)子(SEQ ID NO.14)、OCTS嵌合受體結(jié)構(gòu)域和PDL1單鏈抗體；OCTS嵌合受體結(jié)構(gòu)域包括：CD8 leader嵌合受體信號(hào)肽(SEQ ID NO.15)、PDL1單鏈抗體輕鏈VL(SEQ ID NO.16)、PDL1單鏈抗體重鏈VH(SEQ ID NO.17)、EGFRvIII單鏈抗體輕鏈VL(SEQ ID NO.18)、EGFRvIII單鏈抗體重鏈VH(SEQ ID NO.19)、抗體內(nèi)鉸鏈Inner?Linker(SEQ ID NO.20)、單鏈抗體間鉸鏈Inter?Linker(SEQ ID NO.21)、CD8 Hinge嵌合受體鉸鏈(SEQ ID NO.22)、CD8 Transmembrane嵌合受體跨膜區(qū)(SEQ ID NO.23)、TCR嵌合受體T細(xì)胞激活域(SEQ ID NO.26)以及嵌合受體共刺激因子區(qū)域。此外，本發(fā)明還公開(kāi)了該載體的構(gòu)建方法及其在制備治療惡性膠質(zhì)瘤的藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)生物領(lǐng)域，具體涉及一種載體，尤其涉及一種基于OCTS技術(shù)的惡性膠質(zhì)瘤CAR-T治療載體。此外，本發(fā)明還涉及該載體的構(gòu)建方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

腫瘤免疫治療的理論基礎(chǔ)是免疫系統(tǒng)具有識(shí)別腫瘤相關(guān)抗原、調(diào)控機(jī)體攻擊腫瘤細(xì)胞(高度特異性的細(xì)胞溶解)的能力。1950年代，Burnet和Thomas提出了“免疫監(jiān)視”理論，認(rèn)為機(jī)體中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)的突變的腫瘤細(xì)胞可被免疫系統(tǒng)所識(shí)別而清除，為腫瘤免疫治療奠定了理論基礎(chǔ)[Burnet FM.Immunological aspects of malignant disease.Lancet,1967；1:1171-4]。隨后，各種腫瘤免疫療法包括細(xì)胞因子療法、單克隆抗體療法、過(guò)繼免疫療法、疫苗療法等相繼應(yīng)用于臨床。

2013年一種更先進(jìn)的腫瘤免疫療法---CAR-T療法成功用于臨床，并表現(xiàn)了前所未有的臨床療效。CAR-T，全稱是Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫療法。該療法是通過(guò)轉(zhuǎn)基因的手段，將啟動(dòng)子、抗原識(shí)別區(qū)、共刺激因子、效應(yīng)區(qū)等共同組成的嵌合分子，導(dǎo)入T細(xì)胞基因組內(nèi)，從而使T細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的識(shí)別、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、殺傷等功能融為一體，實(shí)現(xiàn)了對(duì)靶細(xì)胞的特異性殺傷[Eleanor J.Cheadle,etal.CAR T cells:driving the road from the laboratory to theclinic.Immunological Reviews 2014.Vol.257:91–106]。CAR-T療法在臨床上最領(lǐng)先的有諾華的CLT019，采用CLT019治療復(fù)發(fā)難治急性淋巴細(xì)胞白血病患者，六個(gè)月的腫瘤無(wú)進(jìn)展生存率達(dá)到67％，其中最長(zhǎng)的應(yīng)答時(shí)間達(dá)到兩年多。總部位于中國(guó)上海的上海優(yōu)卡迪生物醫(yī)藥科技有限公司與醫(yī)院合作，截止到2017年2月，共治療復(fù)發(fā)難治急性淋巴細(xì)胞白血病患者36例，其中完全24例，緩解比例達(dá)到66.6％。這是抗癌研究的顛覆性突破。CAR-T細(xì)胞療法可能是最有可能治愈癌癥的手段之一，并被《Science》雜志評(píng)為2013年度十大科技突破之首。

CAR-T目前在治療B-淋巴細(xì)胞白血病等幾種類型的血液腫瘤方面療效顯著，但是也存在一些局限性，目前一個(gè)嵌合抗原受體只能識(shí)別一種抗原靶標(biāo)，腫瘤細(xì)胞是個(gè)復(fù)雜的群體，含有相應(yīng)抗原的腫瘤細(xì)胞被清除以后，不含相應(yīng)抗原的腫瘤細(xì)胞會(huì)迅速增殖，一段時(shí)間后導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)。那么要使CAR-T識(shí)別能同時(shí)識(shí)別兩種抗原，就有兩個(gè)方案可選：一是將兩組嵌合抗原受體構(gòu)建進(jìn)入一個(gè)慢病毒轉(zhuǎn)基因載體，一次性將兩組嵌合抗原受體轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)入原代T淋巴細(xì)胞；二是用兩個(gè)慢病毒轉(zhuǎn)基因載體分兩次轉(zhuǎn)導(dǎo)，將兩組嵌合抗原受體分別轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)入原代T淋巴細(xì)胞。

方案一的缺點(diǎn)在于占用慢病毒轉(zhuǎn)基因載體的寶貴容量，不利于裝載其它功能元件；轉(zhuǎn)基因載體包裝效率低；基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率非常低，很難轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)入原代T淋巴細(xì)胞內(nèi)。

方案二的缺點(diǎn)在于需要經(jīng)過(guò)兩次轉(zhuǎn)導(dǎo)，兩次轉(zhuǎn)導(dǎo)的綜合效率較低，轉(zhuǎn)導(dǎo)周期時(shí)間長(zhǎng)，原代細(xì)胞容易衰老，導(dǎo)致增殖能力衰退，殺傷功能下降，影響腫瘤清除療效。