[發明專利]一種基于OCTS技術的惡性膠質瘤CAR-T治療載體及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 201710390650.5
• 申請日: 2017-05-27
• 公開（公告）號: CN107267555B
• 公開（公告）日: 2020-03-20
• 發明（設計）人: 祁偉;俞磊;康立清;林高武;余宙
• 申請（專利權）人: 上海優卡迪生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N15/62;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 上海市匯業律師事務所 31325
• 代理人: 王函

1.一種基于OCTS技術的惡性膠質瘤CAR-T治療載體，其特征在于，包括慢病毒骨架質粒、人EF1α啟動子、OCTS嵌合受體結構域和PDL1單鏈抗體；

所述慢病毒骨架質粒包括：用于目的菌株大量擴增的含氨芐青霉素抗性基因AmpR序列，如SEQ ID NO.1所示；用于質粒復制的原核復制子pUC Ori序列，如SEQ ID NO.2所示；用于增強真核細胞內的復制的病毒復制子SV40 Ori序列，如SEQ ID NO.3所示；用于慢病毒包裝的慢病毒包裝順式元件；ZsGreen1綠色熒光蛋白，如SEQ ID NO.11所示；IRES核糖體結合序列，如SEQ ID NO.12所示；用于增強轉基因的表達效率的eWPRE增強型土撥鼠乙肝病毒轉錄后調控元件，如SEQ ID NO.13所示；

所述人EF1α啟動子的序列如SEQ ID NO.14所示；

所述OCTS嵌合受體結構域包括：如SEQ ID NO.15所示的CD8 leader嵌合受體信號肽、如SEQ ID NO.16所示的PDL1單鏈抗體輕鏈VL、如SEQ ID NO.17所示的PDL1單鏈抗體重鏈VH、如SEQ ID NO.18所示的EGFRvIII單鏈抗體輕鏈VL、如SEQ ID NO.19所示的EGFRvIII單鏈抗體重鏈VH、如SEQ ID NO.20所示的抗體內鉸鏈Inner-Linker、如SEQ ID NO.21所示的單鏈抗體間鉸鏈Inter-Linker、如SEQ ID NO.22所示的CD8 Hinge嵌合受體鉸鏈、如SEQ IDNO.23所示的CD8 Transmembrane嵌合受體跨膜區、如SEQ ID NO.26所示的TCR嵌合受體T細胞激活域以及嵌合受體共刺激因子區域；所述嵌合受體共刺激因子區域采用如SEQ IDNO.24所示的CD28嵌合受體共刺激因子以及如SEQ ID NO.25所示的CD134嵌合受體共刺激因子組合。

2.如權利要求1所述的載體，其特征在于，所述慢病毒包裝順式元件采用第二代慢病毒載體或第三代慢病毒載體；所述第二代慢病毒載體包括：如SEQ ID NO.5所示的慢病毒5terminal LTR、如SEQ ID NO.6所示的慢病毒3 terminal Self-Inactivating LTR、如SEQID NO.7所示的Gag順式元件、如SEQ ID NO.8所示的RRE順式元件、如SEQ ID NO.9所示的env順式元件、如SEQ ID NO.10所示的cPPT順式元件；所述第三代慢病毒載體包括：如SEQID NO.5所示的慢病毒5 terminal LTR、如SEQ ID NO.6所示的慢病毒3 terminal Self-Inactivating LTR、如SEQ ID NO.7所示的Gag順式元件、如SEQ ID NO.8所示的RRE順式元件、如SEQ ID NO.9所示的env順式元件、如SEQ ID NO.10所示的cPPT順式元件，以及如SEQID NO.4所示的RSV啟動子。

3.如權利要求1所述的載體，其特征在于，所述如SEQ ID NO.16所示的PDL1單鏈抗體輕鏈VL、如SEQ ID NO.17所示的PDL1單鏈抗體重鏈VH、如SEQ ID NO.18所示的EGFRvIII單鏈抗體輕鏈VL、如SEQ ID NO.19所示的EGFRvIII單鏈抗體重鏈VH、如SEQ ID NO.20所示的抗體內鉸鏈Inner-Linker、如SEQ ID NO.21所示的單鏈抗體間鉸鏈Inter-Linker采用串聯連接方式或者轉角連接方式；所述串聯連接方式具體為：PDL1單鏈抗體輕鏈VL與EGFRvIII單鏈抗體輕鏈VL采用單鏈抗體間鉸鏈Inter-Linker連接，PDL1單鏈抗體輕鏈VL與PDL1單鏈抗體重鏈VH采用抗體內鉸鏈Inner-Linker連接，EGFRvIII單鏈抗體輕鏈VL與EGFRvIII單鏈抗體重鏈VH采用抗體內鉸鏈Inner-Linker連接；所述轉角連接方式具體為：EGFRvIII單鏈抗體輕鏈VL與EGFRvIII單鏈抗體重鏈VH采用抗體內鉸鏈Inner-Linker連接，PDL1單鏈抗體輕鏈VL與EGFRvIII單鏈抗體重鏈VH采用單鏈抗體間鉸鏈Inter-Linker連接，PDL1單鏈抗體重鏈VH與EGFRvIII單鏈抗體輕鏈VL采用單鏈抗體間鉸鏈Inter-Linker連接。