[發明專利]一種高分子囊泡電穿孔法載入負載物的方法

在審

• 申請號: 201710390466.0
• 申請日: 2017-05-27
• 公開（公告）號: CN107281105A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發明（設計）人: 王林格;劉思琦
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K47/32;A61K47/34;A61K49/00
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司44245
• 代理人: 陳智英

技術領域

本發明屬于高分子囊泡的技術領域，涉及一種高分子囊泡電穿孔法載入負載物的方法。

背景技術

隨著現代醫學和分子生物學的發展，藥物控釋和靶向給藥、以及智能或靶向性藥物載體(如脂質體、膠束、高分子囊泡等)日益受到關注。高分子囊泡(或稱為聚合物囊泡)是一種由兩親性嵌段共聚物自組裝形成“空心球”結構的分子有序聚集體，其球體中間是由親水鏈段環繞形成的“中空”的水相腔體，類似球殼的外(殼)膜層由親水鏈段層-疏水層鏈段層-親水層鏈段層所形成的“雙層外殼膜”構成。與脂質體囊泡(由小分子脂質體構成)相比，高分子囊泡的膜由高分子鏈段構成，因此更具剛性、穩定性，且高分子鏈段種類豐富，使高分子囊泡具有多樣性的功能，在許多領域有非常廣泛的應用，特別是在生物醫藥領域。高分子囊泡可作為疏水性負載物(藥物及化合物，負載于外殼雙層膜中)和親水性負載物(包裹在內部空腔)的載體。此外一些小尺寸(50-400nm左右)的高分子囊泡可以被細胞內吞，高分子囊泡在藥物控釋、靶向釋放與基因治療方面受到了廣泛的關注。

高分子囊泡的形成通常是由于兩親性嵌段共聚物在水性環境中因嵌段的溶解性不同而產生微相分離，兩親性嵌段共聚物因此在水相中通過自組裝過程形成三明治的膜結構，疏水段聚集形成高分子囊泡膜中間部分，而親水段位于疏水層的內外側。目前，高分子囊泡主要用于包載水溶性負載物，一般是隨其自組裝過程進行負載的，即負載物一般是溶解在水相中，部分負載物因高分子囊泡的形成而被包裹在囊泡內部的水相空腔中。通過自組裝形成的高分子囊泡往往存在囊泡尺寸不均勻的情況，并有負載藥利用率低、負載物品種受限的問題，從而影響載入負載物的應用效果。具體來說，在高分子囊泡形成(自組裝)過程中載藥存在以下問題：尺寸較大(>400nm)的高分子囊泡不能被細胞內吞，達不到進入細胞給藥和釋藥效果，也造成藥物浪費；尺寸非常小(<50nm)高分子囊泡由于親水內腔較小，包載藥物效率低，也造成較差的應用效果。因此，從載入負載物(藥物和化合物)應用的需要，探索一種高分子囊泡形成后再載入負載物的方法顯得尤為重要。

發明內容

為了克服現有技術中高分子囊泡載入負載物存在的囊泡尺寸不均、負載率低、負載品種受限問題，本發明提供一種高分子囊泡電穿孔法載入負載物的方法。該方法先進行高分子囊泡的制備，并通過純化和分離技術，優選尺寸合適且分布均勻的高分子囊泡用于負載不同負載物，以便控制質量；再根據不同應用目的使用電穿孔法、選擇性地挑選負載物種類和濃度進行負載，提高負載效率。

本發明的目的通過以下技術方案實現：

一種高分子囊泡電穿孔法載入負載物的方法，包括以下步驟：

S1.將嵌段共聚物制備成高分子囊泡，然后純化分離出所需尺寸的高分子囊泡溶液；

S2.采用溶劑將負載物配成溶液，得到負載物溶液；

S3.將步驟S1所得高分子囊泡溶液與步驟S2所得的負載物溶液混合，采用電穿孔法將負載物載入高分子囊泡中，純化分離，得到載有負載物高分子囊泡。

步驟S1中所述嵌段共聚物為兩親性嵌段共聚物中一種以上，兩親性嵌段共聚物中親水鏈段為聚乙二醇(PEG)、聚2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰膽堿(PMPC)、聚丙烯酸(PAA)、聚乙醇酸(PGA)中的一種，疏水鏈段為聚乳酸(PLA)、聚己內酯(PCL)、聚2-二甲胺基乙基甲基丙烯酸酯(PDMA)、聚2-二乙胺基乙基甲基丙烯酸酯(PDEA)、聚2-二異丙胺基乙基甲基丙烯酸酯(PDPA)中的一種；所述兩親性嵌段共聚物為兩嵌段、多嵌段或改性共聚物。

更為優選地，所述嵌段共聚物為聚乙二醇-b-聚乳酸嵌段共聚物(PEG-b-PLA)，聚乙二醇-b-聚己內酯嵌段共聚物(PEG-b-PCL)，聚2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰膽堿-b-聚2-二異丙胺基乙基甲基丙烯酸酯(PMPC-b-PDPA)，聚乳酸-b-聚乙二醇-b-聚乳酸嵌段共聚物(PLA-b-PEG-b-PLA)，聚乙二醇-b-聚2-二異丙胺基乙基甲基丙烯酸酯(PEG-b-PDPA)或聚己內酯-b-聚乙二醇-b-聚己內酯嵌段共聚物(PCL-b-PEG-b-PCL)中的一種以上。

步驟S1中所述高分子囊泡的制備方法為溶劑交換法、膜水合法或直接水合法；

所述溶劑交換法，具體過程為：將嵌段共聚物溶于有機溶劑中，加入水或PBS緩沖溶液，持續攪拌使有機溶劑完全揮發，得到高分子囊泡溶液；