[發明專利]一種高分子囊泡電穿孔法載入負載物的方法

在審

• 申請號: 201710390466.0
• 申請日: 2017-05-27
• 公開（公告）號: CN107281105A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發明（設計）人: 王林格;劉思琦
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K47/32;A61K47/34;A61K49/00
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司44245
• 代理人: 陳智英

1.一種高分子囊泡電穿孔法載入負載物的方法，其特征在于：包括以下步驟：

S1.將嵌段共聚物制備成高分子囊泡，然后純化分離出所需尺寸的高分子囊泡溶液；

S2.采用溶劑將負載物配成溶液，得到負載物溶液；

S3.將步驟S1所得高分子囊泡溶液與步驟S2所得負載物溶液混合，采用電穿孔法將負載物載入高分子囊泡中，純化分離，得到載有負載物高分子囊泡。

2.根據權利要求1所述高分子囊泡電穿孔法載入負載物的方法，其特征在于：步驟S3中所述電穿孔法的條件為：電穿孔脈沖電壓為500～2500V，脈沖時間為0.1～0.5ms，操作重復次數為1～20次，操作溫度為0～10℃。

3.根據權利要求1所述高分子囊泡電穿孔法載入負載物的方法，其特征在于：步驟S1中所述嵌段共聚物為兩親性嵌段共聚物中一種以上，兩親性嵌段共聚物中親水鏈段為聚乙二醇、聚2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰膽堿、聚丙烯酸、聚乙醇酸中的一種，疏水鏈段為聚乳酸、聚己內酯、聚2-二甲胺基乙基甲基丙烯酸酯、聚2-二乙胺基乙基甲基丙烯酸酯、聚2-二異丙胺基乙基甲基丙烯酸酯中的一種；所述兩親性嵌段共聚物為兩嵌段、多嵌段或改性共聚物。

4.根據權利要求3所述高分子囊泡電穿孔法載入負載物的方法，其特征在于：所述嵌段共聚物為聚乙二醇-b-聚乳酸嵌段共聚物，聚乙二醇-b-聚己內酯嵌段共聚物，聚2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰膽堿-b-聚2-二異丙胺基乙基甲基丙烯酸酯，聚乳酸-b-聚乙二醇-b-聚乳酸嵌段共聚物，聚乙二醇-b-聚2-二異丙胺基乙基甲基丙烯酸酯或聚己內酯-b-聚乙二醇-b-聚己內酯嵌段共聚物中的一種以上。

5.根據權利要求1所述高分子囊泡電穿孔法載入負載物的方法，其特征在于：步驟S1中所述高分子囊泡的制備方法為溶劑交換法、膜水合法或直接水合法；

所述溶劑交換法，具體過程為：將嵌段共聚物溶于有機溶劑中，加入水或PBS緩沖溶液，持續攪拌使有機溶劑完全揮發，得到高分子囊泡溶液；

所述膜水合法，具體過程為：將嵌段共聚物溶于有機溶劑中，待完全溶解后，成膜；將膜與水或PBS緩沖溶液進行攪拌12～72h，得到高分子囊泡溶液；

所述直接水合法，具體過程為：將嵌段共聚物粉末加入水或PBS緩沖溶液中攪拌12～120h，得到高分子囊泡溶液。

6.根據權利要求5所述高分子囊泡電穿孔法載入負載物的方法，其特征在于：所述制備方法中有機溶劑為四氫呋喃、丙酮、N,N-二甲基甲酰胺、醋酸甲酯、N,N-二甲基乙酰胺、甲基異丁酮、二氯甲烷、石油醚、氯仿、乙醇、六氟異丙醇、甲基氰中的一種以上；

所述制備方法中攪拌速度為100～750r/min。

7.根據權利要求1所述高分子囊泡電穿孔法載入負載物的方法，其特征在于：步驟S2中所述負載物為藥物、抗體、蛋白、基因片段、生長因子、傳統熒光分子、聚集誘導發光分子中的一種以上，但不限于此；

步驟S2中所述溶劑為水、PBS水溶液、四氫呋喃、丙酮、N,N-二甲基甲酰胺、醋酸甲酯、N,N-二甲基乙酰胺、甲基異丁酮、二氯甲烷、氯仿、乙醇、六氟異丙醇、甲基氰中的一種以上。

8.根據權利要求1所述高分子囊泡電穿孔法載入負載物的方法，其特征在于：步驟S1中所述高分子囊泡溶液的濃度為1mg/mL～100mg/mL；

步驟S2中所述負載物溶液的濃度是0.01～10wt％；

步驟S3中所述高分子囊泡溶液與負載物溶液的體積比為(1～100)：1。

9.根據權利要求1所述高分子囊泡電穿孔法載入負載物的方法，其特征在于：步驟S1中所述純化分離的方法為透析法、中空纖維膜法或液相色譜柱法中的一種以上；

步驟S3中所述純化分離的方法為透析法、中空纖維膜法或液相色譜柱法中的一種以上。

10.根據權利要求1所述高分子囊泡電穿孔法載入負載物的方法，其特征在于：步驟S1中所述純化分離后的高分子囊泡的尺寸為50nm～400nm；

步驟S3中所述載有負載物高分子囊泡溶液的濃度為10mg/mL～20mg/mL。