[發明專利]一種低值魚抗菌肽的加工方法

在審

• 申請號: 201710390345.6
• 申請日: 2017-05-27
• 公開（公告）號: CN107099572A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: 葉力
• 申請（專利權）人: 舟山達康科技有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K14/46
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙)11548
• 代理人: 李靜

技術領域

本發明涉及抗菌肽加工領域，尤其是涉及一種低值魚抗菌肽的加工方法。

技術背景

抗菌肽是一類具有抗菌作用的小分子多肽，一般由12-15個氨基酸組成，抗菌肽因其優良的抗菌特性減少了傳染病的發病率，成為抗生素的理想替代品，目前已從自然界發現了兩千多種抗菌肽，抗菌肽具有廣譜抗菌性，可殺死革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌與真菌等。抗菌肽作為抗菌藥物具有無毒副作用、無殘留、無污染等優點，目前關于抗菌肽的制備和抗菌機理研究已廣泛展開。抗菌肽的獲取方法之一酶解法通過水解農副產品和水產品等廢棄物獲得抗菌肽，是大批量生產抗菌肽最有前途的方法之一，這種方法在制備抗菌肽中得到了廣泛應用。

漁獲物中的小魚、小蝦與水產品加工下腳料如內臟等稱為低值魚產品，低值魚因技術原因多用來生產飼料甚至直接作為廢物直接丟棄，大部分的低值魚含有豐富的蛋白質，利用低值魚酶解法生產抗菌肽具有很大的實際意義與經濟價值。

關于酶解法制備抗菌肽的技術有很多方法，現有技術如授權公眾號為

CN 103388014 B的中國發明專利，公開了一種亞鐵螯合抗菌肽制備方法，該方法具有操作簡單、成本低廉等特點，但其具有雜質殘留、抗菌肽獲取量少、純度不高等缺點。

發明內容

本方法的目的在于提供一種低值魚抗菌肽的加工方法。該方法具有取材環保，原料價格低廉，細菌、脂肪酸等雜質殘留量少，成品獲取率高，純度高等優點。

本發明針對背景技術中提到的問題，采取的技術方案為：一種低值魚抗菌肽的加工方法，包括：準備并除菌、脫脂、微波萃取提純、離心提純、酶解、離心純化、硫酸銨純化和成品，具體包括以下步驟：

準備并除菌：取新鮮的魚鰾若干，剖開并除去血管及粘膜后用蒸餾水清洗3-5次，剪碎稱量10-15g置于500ml可密閉不銹鋼容器中，加入20-30g蒸餾水，在壓強為50-80MPa，溫度為90-100℃條件下蒸煮30-50分鐘，其滅菌的基本原理就是高溫高壓對微生物的致死作用，主要是通過破壞細胞膜抑制酶的活性和影響DNA等遺傳物質的復制來實現的；

脫脂：在除菌步驟后得到的魚鰾漿液中加入0.010-0.015g的脂肪酶，在35-38℃條件下，攪拌并通風，使其反應20-30分鐘，然后升溫至90-100℃蒸煮5分鐘使酶失活，降至常溫，完成脂肪酶解和脂肪酸氧化，得到脫脂魚鰾漿液，脂肪酶解和脂肪酸氧化能有效降低脂肪酸的代謝產物的含量；

微波萃取提純：將脫脂步驟后的魚鰾漿液注入1L燒杯中，稱量漿液重量，用蒸餾水把不銹鋼容器壁上的殘留漿液沖洗至燒杯中，并往燒杯中加入蒸餾水，直至沖洗容器壁所用蒸餾水和直接加入燒杯中的蒸餾水總重量是魚鰾漿液重量的25-30倍，攪拌均勻，將漿液進行微波萃取，萃取功率為300-400W，萃取時間為2-3分鐘，微波萃取能將脫脂步驟中生成的雜物去除，有效的提高漿液中蛋白質的占比；

離心提純：將微波萃取提純步驟后的萃取液于4000-4500r/min條件下離心15-20分鐘，取上清液，用蒸餾水潤洗離心管和殘渣再離心提取一次，合并上清液即為魚鰾蛋白提取液，離心提純進一步提純魚鰾蛋白質；

酶解：將離心提純后的魚鰾蛋白提取液注入500ml密閉不銹鋼容器中，用清水潤洗燒杯壁，潤洗液也注入不銹鋼容器中，用0.1ml鹽酸調節其pH為5-7，再加入0.07-0.1g的復合蛋白酶，加入0.02-0.05g的酶活性肽，在50-60℃下反應2.5-3小時，后升溫至90-100℃蒸煮5分鐘使酶失活，后降至常溫，酶活性肽能有效提高復合蛋白酶的水解活性，提高水解反應速率，將提取液中的蛋白質有效酶解為抗菌肽，該酶活性肽的氨基酸序列為：SCASRCKSRCRARRCRARFGKRCICKCFRC；

離心純化：將酶解步驟后的酶解液置于離心機中，于35-38℃在4000-4500r/min條件下離心10-15分鐘，取上清液，將上清液在4-6℃下冷凍離心，在轉速7500-8000r/min條件下下離心10-15分鐘，取上清液備用，有效提純酶解液中抗菌肽的含量；

硫酸銨純化：將研細的硫酸銨按照15-20%的飽和度加入到上述上清液中，4-6℃下保存過夜后在9500-10000r/min下離心30-45分鐘，取上清液加硫酸銨至55-60%飽和度；4-6℃下保存過夜后用9500-10000r/min離心30-45分鐘，取沉淀留用，本步驟先是有效去除了初步分離的雜蛋白，后沉淀所得即為純化抗菌肽。

成品：將硫酸銨純化后的沉淀在-60~-80℃冷藏保存，有助于保存運輸。