[發(fā)明專利]基于磷酸化肽段篩選的標記蛋白評價羊肉品質(zhì)的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710390205.9
• 申請日: 2017-05-27
• 公開（公告）號: CN107064441B
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發(fā)明（設計）人: 劉永峰;張德權;劉滿順;魏燕超;李欣;李錚
• 申請（專利權）人: 陜西師范大學
• 主分類號: G01N33/12
• 分類號: G01N33/12
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責任公司 61201
• 代理人: 高雪霞

本發(fā)明公開了一種基于磷酸化肽段篩選的標記蛋白評價羊肉品質(zhì)的方法，該方法憑借生物質(zhì)譜技術對高、低品質(zhì)羊肉中肽段的磷酸化水平進行定量和定性，并對定性后的磷酸化蛋白進行GO和KEGG富集分析，通過蛋白質(zhì)生物信息分析磷酸化蛋白與羊肉品質(zhì)的潛在關系，將蛋白質(zhì)磷酸化水平在高、低品質(zhì)羊肉中具有明顯差異的磷酸化蛋白作為標記蛋白，從而根據(jù)羊肉中標記蛋白的含量判斷羊肉品質(zhì)的優(yōu)劣。本發(fā)明首次鑒定了羊肉中磷酸化蛋白，為篩選反映羊肉品質(zhì)的標記蛋白提供了依據(jù)，而且可以依據(jù)蛋白質(zhì)磷酸化水平結(jié)果判定羊肉品質(zhì)，提供了一種新的品質(zhì)評價方法，有利于為肉品企業(yè)創(chuàng)造更多的利潤，實現(xiàn)優(yōu)質(zhì)優(yōu)價，應用前景廣闊。

技術領域

本發(fā)明屬于食品品質(zhì)檢測技術領域，具體涉及一種基于磷酸化肽段篩選反映肉品質(zhì)的標記蛋白，采用該標記蛋白評價不同羊肉品質(zhì)的方法。

背景技術

在羊肉品質(zhì)評價中，主要是檢測羊肉中主要成分的含量，目前新鮮羊肉主要成分含量的檢測技術中，許多國家最常用的方法仍然是傳統(tǒng)的化學分析法，該方法存在檢測速度較慢，需要儀器設備多而復雜，花費成本較高，且檢測過程會破壞樣品等缺點，很難做到對新鮮羊肉的在線實時監(jiān)控。為了克服傳統(tǒng)方法中的不足，利用近紅外光譜分析法檢測肉品質(zhì)和變質(zhì)程度是一個很好的選擇，其具有檢測速度快、無需對樣品做過多預處理、可實現(xiàn)無損測量等優(yōu)點，基于近紅外光譜分析技術的肉品質(zhì)檢測也一度成為了肉品質(zhì)評價中的一個熱門，并持續(xù)到現(xiàn)在。

然而，近紅外技術無損檢測羊肉品質(zhì)時，必須要建立檢測模型，需要大量的樣品，并且對樣品的要求高。鑒于傳統(tǒng)方法和近紅外方法都是從表觀和化學物質(zhì)方面來研究肉品質(zhì)的變化，肉品質(zhì)的鑒定未能深入解釋機理，而影響羊肉品質(zhì)的因素比較多，而宰后成熟、胴體分割部位和肌肉中蛋白質(zhì)的結(jié)構與功能特性對肉與肉制品的品質(zhì)影響較為顯著。宰后成熟過程中的肌肉細胞代謝在很大程度上決定著肉的品質(zhì)特性，如pH、嫩度、色澤和持水性等肉品品質(zhì)。而肌肉中的大部分肌漿蛋白、肌原纖維蛋白均受蛋白質(zhì)磷酸化和去磷酸化過程影響，因此磷酸化蛋白可以作為反映羊肉品質(zhì)的蛋白標記。肉品品質(zhì)評價指標主要有pH值、剪切力、肉色、持水性等。這些指標都是肌肉細胞內(nèi)微觀變化的宏觀反映，蛋白質(zhì)作為細胞生命活動功能的行使者，其磷酸化修飾可導致肌肉細胞內(nèi)一系列生理生化變化，從而影響宰后肉品質(zhì)。因此肌肉中關鍵蛋白磷酸化修飾及其磷酸化水平變化可作為反映肉品品質(zhì)的標記。

發(fā)明內(nèi)容

針對目前羊肉評價方法難以深入肉品質(zhì)變化機理以及現(xiàn)有羊肉品質(zhì)分等的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種基于磷酸化肽段定量定性篩選反映羊肉品質(zhì)的標記蛋白并以該標記蛋白評價羊肉品質(zhì)的方法。

解決上述問題所采用的技術方案由下述步驟組成：

1、采集宰后12小時的高品質(zhì)羊肉和低品質(zhì)羊肉樣品。

2、提取步驟1采集樣品中的磷酸化蛋白，并將獲得的磷酸化蛋白酶解，獲得磷酸化肽段。

3、采用生物質(zhì)譜對步驟2獲得的磷酸化肽段進行定性和定量檢測，以定性后的磷酸化肽段在高品質(zhì)羊肉中的相對定量值與低品質(zhì)羊肉中的相對定量值之比的對數(shù)值作為判斷肽段磷酸化水平變化的依據(jù)，即該對數(shù)值大于1則磷酸化水平上調(diào)，該對數(shù)值小于-1則磷酸化水平下調(diào)，該對數(shù)值處于1和-1之間則該磷酸化肽段在高品質(zhì)羊肉和低品質(zhì)羊肉樣品中的磷酸化水平無顯著變化。

4、對步驟3定性后的磷酸化肽段對應的磷酸化蛋白進行GO和KEGG富集分析。

5、根據(jù)步驟4的分析結(jié)果，將高品質(zhì)羊肉樣品和低品質(zhì)羊肉樣品中含量差異顯著的磷酸化蛋白作為標記蛋白。

6、檢測不同待測羊肉樣品中標記蛋白的含量，根據(jù)標記蛋白的含量判斷不同羊肉之間的品質(zhì)高低：如果標記蛋白為高品質(zhì)羊肉標記蛋白，則標記蛋白含量越高說明待測羊肉樣品品質(zhì)越好；如果標記蛋白為低品質(zhì)羊肉標記蛋白，則標記蛋白含量越高說明待測羊肉樣品品質(zhì)越差。

上述步驟1中，所述高品質(zhì)羊肉為羊的背最長肌肉，低品質(zhì)羊肉為羊的腹部肌肉。