[發明專利]一種利用ISSR反應體系分析草果遺傳多樣性的方法

有效

• 申請號: 201710385912.9
• 申請日: 2017-05-26
• 公開（公告）號: CN107164476B
• 公開（公告）日: 2021-01-12
• 發明（設計）人: 盧丙越;馬孟莉;雷恩;王田濤;孟衡玲;袁盛勇;劉艷紅;蘇一蘭;李春燕;張薇;張虹
• 申請（專利權）人: 紅河學院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;G16B40/00
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 夏艷

本發明屬于分子生物學DNA標記技術與應用領域，本發明公開了一種利用ISSR反應體系分析草果遺傳多樣性的方法，其中，ISSR反應體系如下：每25μL的反應體系中含有不含Mg²⁺的10×PCR buffer 3.0μL、Taq酶1.5U、Mg²⁺1.5mmol/L、dNTP 0.25mmol/L、引物0.3μmol/L和模板DNA 50ng；將上述反應混合液按如下程序進行擴增：95℃預變性5min，95℃變性1min，50?58℃退火1min，72℃延伸1min，35個循環，最后72℃延伸10min，4℃保存。本發明為草果資源鑒定、遺傳多樣性分析等科學研究提供技術指導和理論支持。

技術領域

本發明屬于分子生物學DNA標記技術與應用領域，具體地說，涉及一種利用ISSR反應體系分析草果遺傳多樣性的方法。

背景技術

草果(Amomum tsaoko Crevost et Lemaire)是姜科豆蔻屬植物中一種多年生草本植物，不僅是我國食品加工業和輕工業的重要原料，而且是一種傳統的中藥材，有燥濕、健胃、祛痰、溫中、順氣、抗瘧等功能，還是大眾的調料食品，國際、國內市場需求量大。草果對生長環境條件要求較高，一般生長在海拔800～1500m的北熱帶和中、南亞熱帶中低山區，年降雨量在1200～1600mm，年平均氣溫在16～22℃，冬季多霧、濕度大、透光度在40％～50％的陰濕山坡溝谷森林環境下，主要分布在我國云南、廣西和貴州三省局部地區，其中云南是草果主產區，產量約占全國的95％，主要分布在紅河、文山、西雙版納、德宏、保山、思茅、臨滄7個地(州)的31個縣(市)。

分子標記是一種以DNA序列差異性為標記的檢測遺傳多樣性的方法，具有不受外界環境及基因表達與否的影響，不影響實驗材料的性狀、可標記數量大及分辨率高等特點，目前被廣泛應用于生物遺傳研究。ISSR(簡單序列重復區間擴增多態性，Inter simplesequence repeat)分子標記技術是Zietkeiwitcz等(Zietkiewicz E,Rafalski A,LabudaD(1994)Genome fingerprinting by simple sequence repeat(ISSR)-anchoredpolymerase chain reaction amplification.Genomics 20:176–183)于1994年發展起來的一種基于微衛星序列的分子標記。以其簡便迅速、多態性高、重復性好等優點被廣泛應用于動植物的品種鑒定、DNA指紋圖譜構建和種質資源多樣性研究等領域，同時在中草藥種內和種間鑒定等方面得到廣泛運用。目前在姜科植物砂仁中有過利用ISSR標記分析不同產地砂仁遺傳多樣性的報道，但在草果中，應用ISSR分子標記技術進行種質資源鑒定、遺傳多樣性分析的方法尚未見報道。

發明內容

有鑒于此，本發明針對上述的問題，提供了一種利用ISSR反應體系分析草果遺傳多樣性的方法，該方法是一種簡單、易于操作的分子標記技術，可為草果資源鑒定、遺傳多樣性分析等科學研究提供很好的技術指導和理論支持。

為了解決上述技術問題，本發明公開了一種用于草果遺傳多樣性分析的ISSR分子標記引物體系，所述引物序列包括：

UBC807：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

UBC809：其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

UBC835：其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

UBC836：其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

UBC841：其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

UBC842：其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

UBC847：其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；