[發(fā)明專利]皺紋盤鮑硫氧還蛋白過氧化酶及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710384209.6
• 申請日: 2017-05-26
• 公開（公告）號: CN107058252A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 喬琨;劉智禹;方春華;陳貝;潘南;蔡水淋;許旻;劉淑集
• 申請（專利權(quán)）人: 福建省水產(chǎn)研究所
• 主分類號: C12N9/04
• 分類號: C12N9/04;C12N15/81;A23K20/189;A23L33/10;A61K38/44;A61P39/06;A61K8/65;A61Q19/08;C12R1/84
• 代理公司: 北京格旭知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11443
• 代理人: 雒純丹

1.一種編碼皺紋盤鮑硫氧還蛋白過氧化酶的基因，其特征在于，含有SEQ ID NO.1所述的堿基序列或者含有編碼如下蛋白質(zhì)(a)或(b)的基因：

(a)由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

(b)在(a)限定的氨基酸序列中經(jīng)過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且具有硫氧還蛋白過氧化酶活性的由(a)衍生的蛋白質(zhì)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因，其特征在于，用于所述基因擴(kuò)增的引物如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

3.一種皺紋盤鮑硫氧還蛋白過氧化酶，其特征在于，含有權(quán)利要求1所述的編碼超氧化物歧化酶的基因所編碼。

4.一種表達(dá)皺紋盤鮑硫氧還蛋白過氧化酶基因的載體，其特征在于，所述載體為含有權(quán)利要求1所述的硫氧還蛋白過氧化酶基因、AOX1啟動子和終止子序列、多克隆位點以及篩選標(biāo)志的畢赤酵母表達(dá)載體，所述畢赤酵母表達(dá)載體優(yōu)選為pPIC9K。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的載體，其特征在于，所述硫氧還蛋白過氧化酶基因位于畢赤酵母表達(dá)載體pPIC9K的多克隆位點處SnaBⅠ和NotⅠ限制性內(nèi)切酶酶切位點之間。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的載體，其特征在于，所述篩選標(biāo)志為6×His-tag標(biāo)簽。

7.一種皺紋盤鮑硫氧還蛋白過氧化酶制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)構(gòu)建含有編碼皺紋盤鮑硫氧還蛋白過氧化酶的基因的重組表達(dá)載體；

(2)將步驟(1)所得重組表達(dá)載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞，并將宿主細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，獲得可表達(dá)皺紋盤鮑硫氧還蛋白過氧化酶的基因工程菌菌株；

(3)發(fā)酵培養(yǎng)已得到的基因工程菌菌株并進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，獲得表達(dá)產(chǎn)物；

(4)分離純化步驟(3)所得的表達(dá)產(chǎn)物，獲得重組蛋白，皺紋盤鮑硫氧還蛋白過氧化酶；

其中，步驟(1)中所述編碼皺紋盤鮑硫氧還蛋白過氧化酶的基因，含有SEQ ID NO.1所述的堿基序列或者含有編碼如下蛋白質(zhì)(a)或(b)的基因：

(a)由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

(b)在(a)限定的氨基酸序列中經(jīng)過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且具有硫氧還蛋白過氧化酶活性的由(a)衍生的蛋白質(zhì)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述表達(dá)載體為畢赤酵母表達(dá)載體，優(yōu)選為pPIC9K。

9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述宿主細(xì)胞為畢赤酵母GS115菌株。

10.權(quán)利要求3所述的皺紋盤鮑硫氧還蛋白過氧化酶在食品添加劑、藥物制備領(lǐng)域、保健品領(lǐng)域或者化妝品領(lǐng)域中的應(yīng)用。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于，所述食品添加劑為動物飼料添加劑，所述皺紋盤鮑硫氧還蛋白過氧化酶和動物血液的溶血率小于10％。

12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于，所述皺紋盤鮑硫氧還蛋白過氧化酶能夠保護(hù)和修復(fù)過氧化氫引起的細(xì)胞損傷。