[發(fā)明專(zhuān)利]檢測(cè)黃曲霉毒素M1的核酸適配體、傳感器、試劑盒及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710383877.7
• 申請(qǐng)日: 2017-05-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107164384B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭楠;文芳;郭曉東;李松勵(lì);張養(yǎng)東;趙圣國(guó);王加啟
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/115
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/115;G01N33/53;C12Q1/6851
• 代理公司: 北京思元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍

本發(fā)明公開(kāi)了檢測(cè)黃曲霉毒素M₁的核酸適配體、傳感器、試劑盒及應(yīng)用。本發(fā)明首先公開(kāi)了核苷酸為SEQ ID No:1所示的檢測(cè)黃曲霉毒素M₁的核酸適配體，本發(fā)明還公開(kāi)了用所述核酸適配體制備的傳感器以及含有該傳感器溶液的檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明使用PCR技術(shù)作為信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)行信號(hào)放大，大大的降低了檢測(cè)限，檢測(cè)限可達(dá)0.03ng/L。本發(fā)明使用核酸適配體作為識(shí)別單元，用其制備的傳感器檢測(cè)樣品中的黃曲霉毒素M₁的含量，測(cè)定黃曲霉毒素M₁靈敏度高、線性范圍寬，能實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確的定量檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及檢測(cè)黃曲霉毒素M₁的核酸適配體，本發(fā)明進(jìn)一步涉及含有該核酸適配體的傳感器及用其制備的檢測(cè)黃曲霉毒素M₁的試劑盒，本發(fā)明還涉及它們?cè)跈z測(cè)黃曲霉毒素M₁中的應(yīng)用，屬于黃曲霉毒素M₁的檢測(cè)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

黃曲霉毒素M₁(AFM₁)是奶產(chǎn)品中毒性最強(qiáng)的霉菌毒素之一，對(duì)人類(lèi)健康帶來(lái)巨大的危害。AFM₁被世界衛(wèi)生組織(WHO)國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)指定為1類(lèi)致癌物。當(dāng)奶牛采食了含有AFB₁的發(fā)霉飼料后，就會(huì)在牛奶里產(chǎn)生代謝物AFM₁。為了阻止由于污染的飼料和食品的召回帶來(lái)的食品安全恐慌和經(jīng)濟(jì)損失，很多國(guó)家對(duì)AFM₁進(jìn)行了限量。不同食品AFM₁的限量范圍為 0.05-0.5μg kg^-1。因此，為確保食品安全，開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)單，靈敏和特異性的 AFM₁檢測(cè)方法非常重要。

目前已有的黃曲霉毒素檢測(cè)方法主要有：

定量檢測(cè)AFM₁的液相色譜結(jié)合熒光檢測(cè)器和液相色譜結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)，這些儀器檢測(cè)方法需要專(zhuān)業(yè)的操作人員和昂貴的儀器設(shè)備。

一些快速免疫學(xué)方法如ELISA，免疫傳感器方法也得到了廣泛的應(yīng)用。但是在運(yùn)輸和貯存過(guò)程中抗體的穩(wěn)定性難以保證限制了這類(lèi)方法的應(yīng)用。

與抗體有著類(lèi)似功能的核酸適配體，具有低價(jià)格，高穩(wěn)定性，易修飾和易合成等優(yōu)點(diǎn)，可以重復(fù)使用和長(zhǎng)時(shí)間保存。經(jīng)體外篩選獲得的核酸適配體能與目標(biāo)物質(zhì)高特異性地結(jié)合，因此被廣泛應(yīng)用于生物傳感器檢測(cè)領(lǐng)域。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是提供一種用于檢測(cè)黃曲霉毒素M₁的核酸適配體；

本發(fā)明的目的之二是提供一種檢測(cè)黃曲霉毒素M₁的核酸適配體傳感器；

本發(fā)明的目的之三是提供一種含有所述核酸適配體傳感器的用于檢測(cè)黃曲霉毒素M₁的試劑盒；

本發(fā)明的目的之四是將所述的核酸適配體、核酸適配體傳感器以及試劑盒用于檢測(cè)黃曲霉毒素M₁，實(shí)現(xiàn)靈敏度高、線性范圍寬、操作簡(jiǎn)單的檢測(cè)黃曲霉毒素M₁的效果。

本發(fā)明的上述目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明首先提供一種黃曲霉毒素M₁核酸適配體，其為如下所示核苷酸序列：

5′-ATCCGTCACACCTGCTCTGACGCTGGGGTCGACCCG-3′(SEQ ID No:1)。

本發(fā)明還提供一種檢測(cè)黃曲霉毒素M₁的核酸適配體傳感器，該核酸適配體傳感器由以下四部分組成：

(1)DNA序列A：由以下DNA序列構(gòu)成的DNA模板： 5′-GGTGTGACGGATXaXb-3′；其中，Xa和Xb分別代表a個(gè)和b個(gè)任意堿基，a＝b＝20—30；