[發明專利]檢測黃曲霉毒素M1的核酸適配體、傳感器、試劑盒及應用

有效

• 申請號: 201710383877.7
• 申請日: 2017-05-26
• 公開（公告）號: CN107164384B
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 鄭楠;文芳;郭曉東;李松勵;張養東;趙圣國;王加啟
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N33/53;C12Q1/6851
• 代理公司: 北京思元知識產權代理事務所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍

1.一種用于檢測黃曲霉毒素M₁的核酸適配體，其特征在于：其核苷酸為SEQ ID No:1所示。

2.一種檢測黃曲霉毒素M₁的核酸適配體傳感器，其特征在于：所述核酸適配體傳感器由以下四部分組成：

(1)DNA序列A：由以下DNA序列構成的DNA模板：5′-GGTGTGACGGATXaXb-3′；其中，Xa和Xb分別代表a個和b個任意堿基，a＝b＝20—30；

(2)DNA序列B：SEQ ID No:1所述的黃曲霉毒素M₁核酸適配體，其中，在3’端修飾生物素；

(3)PCR引物1，所述PCR引物1的長度為20-30nt，且序列具有如下特征：5’-Xc-3’，5’端的20-30個堿基與DNA序列A的Xb段互補配對；其中，X為任意堿基，c或b為堿基數量，c＝b＝20-30；

(4)PCR引物2，所述PCR引物2的長度為20-30nt，且序列具有如下特征：5’-Xd-3’，5’端的20-30個堿基與DNA序列A的Xa段相同；其中，X代表任意堿基，a或d代表堿基數量，d＝a＝20-30。

3.按照權利要求2所述的核酸適配體傳感器，其特征在于：所述DNA序列A的核苷酸序列為SEQ ID No:2所示。

4.按照權利要求2所述的核酸適配體傳感器，其特征在于：所述PCR引物1的核苷酸序列為SEQ ID No:3所示。

5.按照權利要求2所述的核酸適配體傳感器，其特征在于：所述PCR引物2的核苷酸序列為SEQ ID No:4所示。

6.一種檢測黃曲霉毒素M₁的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括以下組分：

(1)PCR管修飾溶液；

(2)傳感器溶液；

(3)PCR體系溶液；

(4)黃曲霉毒素M₁提取溶液；

所述傳感器溶液包括以下各組分：

權利要求2所述的核酸適配體傳感器、PBST緩沖液、雜交緩沖液和Tris緩沖液。

7.按照權利要求6所述的試劑盒，其特征在于：所述PCR管修飾溶液包括以下組分：戊二醛溶液、碳酸鹽緩沖液、鏈霉親和素；所述傳感器溶液中DNA序列A的濃度為1×10^-3-10nM；所述傳感器溶液中DNA序列B的濃度為5-40nM；所述傳感器溶液中PCR引物1和PCR引物2的濃度為5-20μM；

所述的PCR體系溶液包括以下組分：SYBR Green染料，Taq DNA聚合酶，PCR緩沖液，dNTP和水；

所述黃曲霉毒素M₁提取液為甲醇溶液。

8.按照權利要求7所述的試劑盒，其特征在于：其中，所述戊二醛溶液的濃度為0.8％、碳酸鹽緩沖液的濃度為0.01M；鏈霉親和素的濃度為2.5-5ng·mL^-1；

所述傳感器溶液中DNA序列A的濃度為10nM；

所述傳感器溶液中DNA序列B的濃度為10nM；

所述傳感器溶液中PCR引物1和PCR引物2的濃度為10μM；

所述甲醇溶液為70％甲醇溶液。

9.按照權利要求7所述的試劑盒，其特征在于：所述鏈霉親和素的濃度為2.5ng·mL^-1。