[發(fā)明專利]一種快速檢測(cè)工業(yè)巴氏酵母芳香醇代謝基因的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710383811.8
• 申請(qǐng)日: 2017-05-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107142312B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尹花;董建軍;賀揚(yáng);陳璐;趙玉祥;萬(wàn)秀娟;陳嶸;侯曉平;李梅;楊梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島啤酒股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/686
• 分類號(hào): C12Q1/686;C12Q1/04
• 代理公司: 青島清泰聯(lián)信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37256
• 代理人: 劉雁君

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種快速檢測(cè)工業(yè)巴氏酵母芳香醇代謝基因的方法，包括總RNA的提取、逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)制備cDNA模板、多重PCR反應(yīng)、毛細(xì)血管電泳、產(chǎn)物片段分析，針對(duì)工業(yè)巴氏酵母芳香醇代謝相關(guān)基因ADH1?Sc，ADH1?Sb，ADH3?Sc，ADH3?Sb，ADH4?Sc，ADH4?Sb，ADH5?Sc，ADH5?Sb，ARO8?Sc，ARO9?Sc，ARO9?Sb，ARO10?Sc，ARO10?Sb，ARO80?Sc和ARO80?Sb。本發(fā)明所采用的GeXP多重基因表達(dá)定量分析技術(shù)具有更強(qiáng)的特異性和靈敏性、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，保證了結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性，大大縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。本發(fā)明有利于在不同生產(chǎn)條件下，控制發(fā)酵過(guò)程中芳香醇代謝及含量，提高啤酒的典型風(fēng)味及一致性；并可以通過(guò)快速調(diào)整啤酒中芳香醇類風(fēng)味，突出產(chǎn)品特色及進(jìn)行新產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種快速檢測(cè)工業(yè)巴氏酵母芳香醇代謝基因的方法。

背景技術(shù)

啤酒是一種深受人們喜愛(ài)的低酒精含量且營(yíng)養(yǎng)豐富的飲料。當(dāng)今全球啤酒市場(chǎng)超過(guò)90％是Lager類型的啤酒，因此用于釀制Lager啤酒的下面啤酒酵母(俗稱“Lager酵母”)已被最廣泛地應(yīng)用在啤酒工業(yè)中。Lager酵母(Saccharomyces pastorianus)并不同于1996年已作為模式生物進(jìn)行全基因組測(cè)序的釀酒酵母(S.cerevisiae)，而是一種具有高度染色體倍性、染色體結(jié)構(gòu)組成復(fù)雜的異源多倍體菌種，除攜帶一部分釀酒酵母基因外，還攜帶貝氏酵母(S.bayanus)的遺傳信息。因此對(duì)于Lager酵母中的大部分基因都存在Sc-(S.cerevisiae)和Sb-(S.bayanus)兩個(gè)同源基因。

啤酒中至少有45種不同的醇類，最主要的有脂肪醇和芳香醇兩類。其中脂肪醇中異戊醇含量最豐富，大約有25-120mg/L；而芳香醇中的苯乙醇的含量也較高，大約在5-100mg/L。β-苯乙醇是一種具有玫瑰花香的芳香醇，啤酒酵母具有從頭合成和生物轉(zhuǎn)化L-苯丙氨酸生成β-苯乙醇(即艾氏途徑)的能力。在酵母細(xì)胞中，β-苯乙醇合成走哪一條途徑取決于培養(yǎng)基中的氮源。谷氨酸、銨鹽等一般作為優(yōu)質(zhì)的、較易利用的氮源使用，而氨基酸、尿素等只作為次級(jí)氮源使用。但是，只有當(dāng)L-苯丙氨酸作為唯一氮源時(shí)，艾氏途徑才占優(yōu)勢(shì)。如果環(huán)境中有其他更容易利用的氮源存在，即使在較高的L-苯丙氨酸濃度條件下，L-苯丙氨酸仍有一部分通過(guò)其它途徑被代謝。除此之外，同為芳香醇的酪醇和色醇對(duì)于啤酒風(fēng)味的影響，目前尚未見(jiàn)比較肯定的意見(jiàn)。色醇對(duì)上面發(fā)酵啤酒比較重要，而在下面發(fā)酵啤酒中含量很低，這是酵母對(duì)色氨酸的代謝差異造成的。

目前，熒光定量PCR方法是現(xiàn)在最為常用的定量mRNA的方法。但由于該方法通量不高的局限性，因此需要一種快速、準(zhǔn)確的技術(shù)對(duì)Lager酵母多個(gè)芳香醇代謝相關(guān)基因表達(dá)同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種快速檢測(cè)工業(yè)巴氏酵母芳香醇代謝基因的方法，尤其是采用GeXP多重基因表達(dá)定量分析技術(shù)檢測(cè)工業(yè)巴氏酵母芳香醇代謝相關(guān)基因(ADH1-Sc，ADH1-Sb，ADH3-Sc，ADH3-Sb，ADH4-Sc，ADH4-Sb，ADH5-Sc，ADH5-Sb，ARO8-Sc，ARO9-Sc，ARO9-Sb，ARO10-Sc，ARO10-Sb，ARO80-Sc和ARO80-Sb)表達(dá)的方法，有利于在不同生產(chǎn)條件下，控制發(fā)酵過(guò)程中芳香醇代謝及含量，提高啤酒的風(fēng)味穩(wěn)定性及一致性；并可以通過(guò)快速調(diào)整啤酒中芳香醇風(fēng)味，節(jié)省研發(fā)成本，加速新產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)。